umwelt-online-Demo: Verordnung (EG) Nr. 440/2008 zur Festlegung von Prüfmethoden gemäß der Verordnung (EG) Nr. 1907/2006 zur Registrierung, Bewertung, Zulassung und Beschränkung chemischer Stoffe (REACH)

1.6.1.1 Schmelztemperaturbestimmungsgeräte mit Flüssigkeitsbad

Abbildung 2

1.6.1.2 Schmelztemperaturbestimmungsgeräte mit Metallblock

Abbildung 3

1.6.1.3 Bestimmung mit Fotozelle (automatisch)

1.6.2 Heiztische

1.6.2.1 Kofler-Heizbank

1.6.2.2 Schmelzmikroskop

1.6.2.3 Meniskusmethode (Polyamide)

1.6.3 Methoden zur Bestimmung der Gefriertemperatur

1.6.4 Thermoanalyse

1.6.4.1 Differentialthermoanalyse

1.6.4.2 Differentialscanningkalorimetrie

1.6.5 Stockpunktbestimmung

2. Daten

3. Abschlussbericht

4. Literatur

1. Kapillarmethoden

1.1 Schmelztemperaturbestimmungsgeräte mit Flüssigkeitsbad

1.2 Schmelztemperaturbestimmungsgeräte mit Metallblock

2. Heiztische

2.1 Kofler-Heizbank

2.2 Schmelzmikroskop

2.3 Meniskusmethode (Polyamide)

3. Methoden zur Gefriertemperaturbestimmung

4. Thermoanalyse

4.1 Differentialthermoanalyse

4.2 Differentialscanningkalorimetrie

5. Stockpunktbestimmung

A.2 Siedetemperatur

1. Methoden

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.4.1 Bestimmung mit dem Ebulliometer

1.4.2 Dynamische Methode

1.4.3 Destillationsmethode für die Siedetemperatur

1.4.4 Verfahren nach Siwoloboff

1.4.5 Fotozellendetektion

1.4.6 Differentialthermoanalyse

1.4.7 Differentialscanningkalorimetrie

1.5 Qualitätskriterien

Tabelle 1: Vergleich der Methoden

1.6 Beschreibung der Methoden

1.6.1 Ebulliometer

1.6.2 Dynamische Methode

1.6.3 Destillationsverfahren (Siedebereich)

1.6.4 Verfahren nach Siwoloboff

Abbildung 2 Prinzip nach Siwoloboff

Abbildung 3 Modifiziertes Prinzip

1.6.5 Fotozellendetektion

1.6.6 Thermoanalyse

1.6.6.1 Differentialthermoanalyse

1.6.6.2 Differentialscanningkalorimeter

2. Daten

Tabelle 2: Temperatur-Korrekturfaktoren f_T

3. Abschlussbericht

4. Literatur

1. Ebulliometer

1.1 Schmelztemperaturbestimmungsgeräte mit Flüssigkeitsbad

2. Destillationsverfahren (Siedebereich)

3. Differentialthermoanalyse und Differentialscanningkalorimetrie

A.3 Relative Dichte

1. Methoden

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methoden

1.4.1 Auftriebsmethoden

1.4.1.1 Aräometer (für Flüssigkeiten)

1.4.1.2 Hydrostatische Waage (für Flüssigkeiten und Feststoffe)

1.4.1.3 Tauchkörpermethode (für Flüssigkeiten)

1.4.2 Pyknometer-Methoden

1.4.3 Luftvergleichspyknometer (für Feststoffe)

1.4.4 Schwingungsdichtemesser

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methoden

2. Daten

3. Abschlussbericht

Tabelle Anwendbarkeit der Methoden

4. Literatur

1. Auftriebsmethoden

1.1 Aräometer

1.2 Hydrostatische Waage

1.3 Tauchkörpermethode

2. Pyknometer-Methoden

2.1 Für Flüssigkeiten:

2.2 Für Feststoffe:

3. Luftvergleichspyknometer

A.4 Dampfdruck

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen und Einheiten

1.3 Prinzip der Prüfmethode

Tabelle 1

1.4 Referenzsubstanzen

1.5 Beschreibung der Methode

1.5.1 Dynamische Methode (Cottrell-Verfahren)

1.5.1.1 Prinzip

Abbildungen 1, 2

1.5.1.2 Apparatur

1.5.1.3 Verfahren

1.5.2 Statische Methode

1.5.2.1 Prinzip

1.5.2.2 Apparatur

1.5.2.3 Verfahren

Abbildung 3a 3b

1.5.3 Isoteniskopmethode

1.5.3.1 Prinzip

1.5.3.2 Apparatur

1.5.3.3 Verfahren

Abbildung 4

1.5.4 Effusionsmethode: Dampfdruckgleichgewicht

1.5.4.1 Prinzip

1.5.4.2 Apparatur

1.5.5 Effusionsmethode: Knudsen-Zelle

1.5.5.1 Prinzip

1.5.5.2 Apparatur

1.5.6 Effusionsmethode: isotherme Thermogravimetrie

1.5.6.1 Prinzip

1.5.6.2 Apparatur

1.5.6.3 Verfahren

1.5.7 Gassättigungsmethode

1.5.7.1 Prinzip

1.5.7.2 Apparatur

Abbildung 8

Abbildung 9, 10

1.5.7.3 Verfahren

1.5.8 Rotationsmethode

1.5.8.1 Prinzip

1.5.8.2 Apparatur

2. Daten und Abschlussbericht

2.1 Daten

2.2 Prüfbericht

3. Literatur

Anlage Schätzmethode

A.5 Oberflächenspannung

1. Methoden

1.1 Einleitung

1.2 Definition und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methoden

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methoden

1.6.1 Plattenmethode

1.6.2 Bügelmethode

1.6.3 Ringmethode

1.6.4 OECD-Ringmethode

1.6.4.1 Apparatur

1.6.4.1.1 Beweglicher Probentisch

1.6.4.1.2 Kraftmesssystem

1.6.4.1.3 Messkörper (Ring)

Abbildung Messkörper (alle Abmessungen in mm)

1.6.4.1.4 Messgefäß

1.6.4.2 Vorbereitung der Apparatur

1.6.4.2.1 Reinigung

1.6.4.2.2 Eichung der Apparatur

1.6.4.3 Vorbereitung der Proben

1.6.5 Prüfbedingungen

1.6.6 Durchführung der Prüfung

2. Daten

Tabelle Korrektur der gemessenen Oberflächenspannungswerte

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation der Ergebnisse

4. Literatur

A.6 Wasserlöslichkeit

Definitionen und Einheiten

Beschreibung der Methoden

Vorversuch

Tabelle 1

Säulen-Elutions-Methode

Analytische Bestimmungen

Literatur:

A.8 Verteilungskoeffizient

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.4.1 Schüttelmethode

1.4.2 HPLC-Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.5.1 Wiederholbarkeit

1.5.2 Empfindlichkeit

1.5.3 Anwendbarkeit

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Abschätzung des Verteilungskoeffizienten

1.6.2 Schüttelmethode

1.6.2.1 Vorbereitung

1.6.2.1.1 Vorsättigung der Lösungsmittel

1.6.2.1.2 Vorbereitung der Prüfung

1.6.2.1.3 Prüfsubstanz

1.6.2.2 Prüfbedingungen

1.6.2.3 Messverfahren

1.6.2.3.1 Einstellen des Verteilungsgleichgewichts

1.6.2.3.2 Phasentrennung

1.6.2.4 Analyse

1.6.3 HPLC-Methode

1.6.3.1 Vorbereitung

1.6.3.2 Messung

2. Daten

3. Abschlussbericht

4. Literatur

Anlage 1 Berechnungs-/Schätzverfahren

Anlage 2 Empfohlene Referenzsubstanzen für die HPLC-Methode

A.9 Flammpunkt

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.5.1 Wiederholbarkeit

1.5.2 Empfindlichkeit

1.5.3 Anwendbarkeit

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Vorbereitungen

1.6.2 Versuchsbedingungen

1.6.3 Versuchsausführung

1.6.3.1 Gleichgewichtsmethode

1.6.3.2 Nicht-Gleichgewichtsmethode

2. Daten

3. Bericht

4. Literatur

A.10 Entzündlichkeit (Feste Stoffe)

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Vorversuch

1.6.2 Prüfung der Brenngeschwindigkeit

1.6.2.1 Vorbereitung

1.6.2.2 Versuchsbedingungen

1.6.2.3 Versuchsausführung

2. Daten

3. Bericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation der Ergebnisse

4. Literatur

Abbildung Form und Zubehör zur Herstellung der Schüttung

A.11 Entzündlichkeit (Gase)

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definition und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Gerät

1.6.2 Versuchsbedingungen

1.6.3 Versuchsausführung

2. Daten

3. Bericht

4. Literatur

A.12 Entzündlichkeit (Berührung mit Wasser)

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Prinzip der Methode

1.3.1 Stufe 1

1.3.2 Stufe 2

1.3.3 Stufe 3

1.3.4 Stufe 4

1.4 Referenzsubstanzen

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Stufe 1

1.6.1.1 Versuchsbedingungen

1.6.1.2 Versuchsausführung

1.6.2 Stufe 2

1.6.2.1 Gerät

1.6.2.2 Versuchsbedingungen

1.6.2.3 Versuchsausführung

1.6.3 Stufe 3

1.6.3.1 Versuchsbedingungen

1.6.3.2 Versuchsausführung

1.6.4 Stufe 4

1.6.4.1 Gerät

1.6.4.2 Versuchsbedingungen

1.6.4.3 Versuchsausführung

2. Daten

3. Bericht

4. Literatur

Abbildung Apparatur

A.13 Pyrophore Eigenschaften von festen und flüssigen Stoffen

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Gerät

1.6.2 Versuchsausführung

2. Daten

2.1 Folgerung aus den Ergebnissen

2.2 Auswertung

3. Bericht

4. Literatur

A.14 Explosionsgefahr

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.4.1 Prüfung auf die Sicherheit des Umgangs mit der Substanz

1.4.2 Thermische Empfindlichkeit

1.4.3 Mechanische Empfindlichkeit (Schlag)

1.4.4 Mechanische Empfindlichkeit (Reibung)

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Thermische Empfindlichkeit (Flammenzündung)

1.6.1.1 Apparatur

1.6.1.2 Versuchsbedingungen

1.6.1.3 Versuchsausführung

1.6.1.4 Auswertung

1.6.2 Mechanische Empfindlichkeit (Schlag)

1.6.2.1 Apparatur (Abbildung 4)

1.6.2.2 Versuchsbedingungen

1.6.2.3 Versuchsausführung

1.6.2.4 Auswertung

1.6.3 Mechanische Empfindlichkeit (Reibung)

1.6.3.1 Apparatur (Abbildung 5)

1.6.3.2 Versuchsbedingungen

1.6.3.3 Versuchsausführung

1.6.3.4 Auswertung

2. Daten

3. Bericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation und Bewertung der Ergebnisse

4. Literatur

Anlage Beispiel für Werkstoffspezifikation zur Prüfung auf thermische Empfindlichkeit (vgl. DIN 1623)

Abbildung 1 Apparatur für die Prüfung auf thermische Empfindlichkeit

Abbildung 2 Prüfung auf thermische Empfindlichkeit

Abbildung 3 Kalibrierung der Heizgeschwindigkeit für die Prüfung auf thermische Empfindlichkeit

Abbildung 4 Apparatur zur Prüfung auf Schlagempfindlichkeit

Abbildung 5 Apparatur zur Prüfung auf Reibempfindlichkeit

A.15 Zündtemperatur (Flüssigkeiten und Gase)

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Geräte

1.6.2 Versuchsbedingungen

1.6.3 Versuchsausführung

2. Daten

3. Bericht

4. Literatur

A.16 Relative Selbstentzündungstemperatur für Feststoffe

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definition und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Gerät

1.6.1.1 Ofen

1.6.1.2 Drahtnetz-Kubus

1.6.1.3 Thermoelemente

1.6.1.4 Registriergerät

1.6.2 Versuchsbedingungen

1.6.3 Versuchsausführung

2. Daten

3. Bericht

4. Literatur

Abbildung 1 Muster des Testkubus (Kantenlänge 20 mm)

Abbildung 2 Typische Temperatur/Zeit-Kurve

A.17 Brandfördernde Eigenschaften (Feststoffe)

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanz

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Vorbereitung

1.6.1.1 Prüfsubstanz

1.6.1.2 Brennbare Substanz

1.6.1.3 Zündquelle

1.6.2 Versuchsausführung

1.6.2.1 Vorversuch

1.6.2.2 Hauptversuch

2. Daten

3. Bericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation des Ergebnisses

4. Literatur

Abbildung Form und Zubehör zur Herstellung der Schüttung

A.18 Zahlengemittelte Molmasse und Molmassenverteilung von Polymeren

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Testmethode

1.6.1 Vorbereitung der Standardpolystyrollösungen

1.6.2 Vorbereitung der Probelösung

1.6.3 Apparatur

1.6.4 Injektion und Lösungsmittelzugabesystem

1.6.5 Säule

1.6.6 Theoretische Böden

1.6.7 Trennleistung

1.6.8 Lösungsmittel

1.6.9 Temperaturkontrolle

1.6.10 Detektor

2. Daten und Berichterstattung

2.1 Daten

2.2 Prüfbericht

2.2.1 Prüfsubstanz

2.2.2 Instrumentierung

2.2.3 Systemkalibrierung

2.2.4 Auswertung

3. Literaturhinweise

Anlage Beispiele anderer Methoden zur Bestimmung der zahlengemittelten Molmasse (M_n) von Polymeren

1. Nutzung kolligativer Eigenschaften

1.1 Ebullioskopie/Kryoskopie

1.2 Dampfdruckerniedrigung

1.3 Membranosmometrie

1.4 Dampfphasen-Osmometrie

2. Endgruppen-Analyse

A.19 Niedermolekularer Anteil von Polymeren

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Prüfmethode

1.6.1 Vorbereitung der Standardpolystyrollösungen

1.6.2 Vorbereitung der Probelösung

1.6.3 Berichtigungen aufgrund von Verunreinigungen und Zusatzstoffen

1.6.4 Apparatur

1.6.5 Injektion und Lösungsmittelzugabesystem

1.6.6 Säule

1.6.7 Theoretische Böden

1.6.8 Trennleistung

1.6.9 Lösungsmittel

1.6.10 Temperaturkontrolle

1.6.11 Detektor

2. Daten und Berichterstattung

2.1 Daten

2.2 Prüfbericht

2.2.1 Prüfsubstanz

2.2.2 Instrumentierung

2.2.3 Systemkalibrierung

2.2.4 Angaben zum niedermolekularen Anteil

2.2.5 Auswertung

3. Literaturhinweise

Anlage Korrektur des niedermolekularen Anteils um unlösliche Polymerfraktionen

A.20 Lösungs-/Extraktionsverhalten von Polymeren in Wasser

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Referenzsubstanzen

1.3 Prinzip der Prüfmethode

1.4 Qualitätskriterien

1.5 Beschreibung der Prüfmethode

1.5.1 Ausstattung

1.5.2 Probenvorbereitung

1.5.3 Verfahren

1.5.4 Analyse

1.5.4.1 Test mit einer Probengröße

1.5.4.2 Test mit zwei unterschiedlichen Probengrößen

2. Daten

2.1 Test mit einer Probengrösse

2.2 Test mit zwei unterschiedlichen Probengrössen

3. Abschlussbericht

3.1 Testbericht

3.1.1 Prüfsubstanz

3.1.2 Versuchsbedingungen

3.1.3 Ergebnisse

4. Hinweise

A.21 Brandfördernde Eigenschaften (Flüssige Stoffe)

1. Verfahren

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzstoff

1.4 Prinzip des Prüfverfahrens

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung des Verfahrens

1.6.1 Vorbereitung

1.6.1.1 Brennbarer Stoff

1.6.1.2 Apparatur

1.6.1.2.1 Druckgefäß

1.6.1.2.2 Zündvorrichtung

1.6.2 Durchführung des Tests

2. Daten

2.1 Ergebnisverarbeitung

Tabelle 1: Ergebnisbeispiele

3. Bericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Analyse der Ergebnisse

4. Bezugsdokumente

Abbildung 1 Druckgefäß

Abbildung 2 Ständer

Abbildung 3 Zündvorrichtung

A.22 Längengewichteter mittlerer geometrischer Durchmesser von Fasern

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Umfang und Einschränkungen

1.4 Prinzip der Testmethode

1.5 Beschreibung der Testmethode

1.5.1 Sicherheits-Vorsichtsmaßnahmen

1.5.2 Geräte/Apparatur

1.5.3 Testverfahren

1.5.3.1 Probenahme

1.5.3.2 Vorbereitung der Probe

1.5.3.3 Kalibrierung und Betrieb des REM

1.5.3.3.1 Kalibrierung

1.5.3.3.2 Betrieb

1.5.3.4 Größenbestimmung

1.5.3.4.1 Bewertung der Probe bei geringer Vergrößerung

1.5.3.4.2 Längengewichtung der Faserdurchmesser

1.5.3.4.3 Bestimmung der Fasergröße

2. Daten

2.1 Behandlung der Ergebnisse

3. Berichtserstellung

4. Literatur

A.23 1-Octanol/Wasser-Verteilungskoeffizient: Methode zur Prüfung unter langsamem Rühren

Definitionen und Einheiten

Bedeutung und Anwendung

Anwendungsbereich

Informationen zur Prüfsubstanz

Herstellung der Prüflösungen

Geräte und Apparatur

Extraktion und Analyse der Proben

Durchführung der Prüfung

Auswertung der Ergebnisse

Anlage 1 Tabelle zur Berechnung der für den Nachweis von prüßubstanzen mit unterschiedlichen logP_OW-Werten in der wässrigen Phase mindestens erforderlichen Volumina

Anlage 2 Beispiel eines Prüfgefäßes mit Glasmantel zur Bestimmung von P_OW unter langsamem Rühren

A.24 Verteilungskoeffizient (N-Octanol/Wasser), Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie (HPLC-Methode)

Referenzstoffe Tabelle 1: Empfohlene Referenzstoffe

Bestimmung des P_ow-Wertes des Prüfstoffs

Vorabschätzung des Verteilungskoeffizienten

Bestimmung der Totzeit t₀

Regressionsgleichung

Anlage Methoden zur Berechnung von P_ow-Werten

Prinzip der Berechnungsverfahren

Zuverlässigkeit berechneter Werte

Fujita-Hansch'sche π-Methode

Rekker-Methode

Hansch-Leo-Methode

Kombinierte Methode

Literatur zu Berechnungsmethoden

A.25 Dissoziationskonstanten in Wasser (Titrationsverfahren - Spektrofotometrisches Verfahren - Konduktometrisches Verfahren)

Methode - Einleitung, Zweck, Anwendungsbereich, Relevanz, Anwendung und Versuchsgrenzen

Definitionen und Einheiten

Beschreibung der Prüfverfahren

Analysen

Durchführung des Tests

Titrationsverfahren

Spektrofotometrisches Verfahren

Konduktometrisches Verfahren

Spektrofotometrisches Verfahren

Ergebnisauswertung

Titrationsverfahren

Konduktometrisches Verfahren

Teil B Toxizität und sonstiger Auswirkungen auf die Gesundheit

Allgemeine Einleitung

A. Charakterisierung der Prüfsubstanz

B. Tierpflege

C. Alternative Prüfmethoden

D. Bewertung und Interpretation

E. Literaturhinweise

B.1 bis - Akute orale Toxizität - Fest-Dosis-Methode

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Prüfmethode

1.4 Beschreibung der Prüfmethode

1.4.1 Auswahl der Tierspezies

1.4.2 Haltung und Fütterung

1.4.3 Vorbereitung der Versuchstiere

1.4.4 Vorbereitung der Dosen

1.5 Verfahrensweise

1.5.1 Verabreichung der Dosen

1.5.2 Vorstudie

1.5.3 Hauptstudie

1.5.3.1 Anzahl der Versuchstiere und Dosierung

1.5.3.2 Limit-Test

1.6 Beobachtungen

1.6.1 Körpergewicht

1.6.2 Pathologie

2. Daten

3. Bericht

3.1 Testbericht

4. Literatur

Anlage 1 Prüfverfahren für die Vorstudie

Anlage 2 Prüfverfahren für die Hauptstudie

Anlage 3 Kriterien für die Klassifizierung von Testsubstanzen mit erwarteten LD₅₀-Werten über 2.000 mg/kg ohne erforderliche Tests

Anlage 4 Prüfmethode B.1 bis

B.1.tris Akute orale Toxizität - Akut-toxische Klassenmethode

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Prüfmehode

1.4 Beschreibung der Prüfmethode

1.4.1 Auswahl der Tierspezies

1.4.2 Haltung und Fütterung

1.4.3 Vorbereitung der Versuchstiere

1.4.4 Vorbereitung der Dosen

1.5 Verfahrensweise

1.5.1 Verabreichung der Dosen

1.5.2 Anzahl der Versuchstiere und Dosierung

1.5.3 Limit-Test

1.6 Beobachtungen

1.6.1 Körpergewicht

1.6.2 Pathologie

2. Daten

3. Bericht

3.1 Prüfbericht

4. Literaturhinweise

Be Vorgehensweise für alle Startdosen

Anlage 1A Prüfverfahren bei einer Startdosis von 5 mg pro kg Körpergewicht

Anlage 1B Prüfverfahren bei einer Startdosis von 50 mg pro kg Körpergewicht

Anlage 1C Prüfverfahren bei einer Startdosis von 300 mg pro kg Körpergewicht

Anlage 1D Prüfverfahren bei einer Startdosis von 2.000 mg pro kg Körpergewicht

Anlage 2 Kriterien für die Klassifizierung von Testsubstanzen mit erwarteten LD₅₀-Werten über 2.000 mg/kg ohne erforderliche Tests

Anlage 3 Prüfverfahren B.1 tris

B.2 Akute Inhalationstoxizität

Auswahl von Versuchstierarten

Vorbereitung der Tiere

Tierhaltung

Inhalationskammern

Verabreichung der Konzentrationen

Partikelgrößenverteilung

Vorbereitung der Prüfsubstanz in einem Vehikel

Kontrolltiere

Luftstrom in der Inhalationskammer

Temperatur und relative Luftfeuchtigkeit in der Inhalationskammer

Prüfsubstanz: nominale Konzentration

Prüfsubstanz: tatsächliche Konzentration

Prüfsubstanz: Partikelgrößenverteilung

Allgemeine Überlegungen: traditionelles Protokoll

Traditionelles Protokoll

Vorstudie: traditionelles Protokoll

Limit-Test: traditionelles Protokoll

Hauptstudie: traditionelles Protokoll

Konzentration-x-Zeit-Protokoll (C x T)

Allgemeine Überlegungen: C-x-t-Prokokoll

Vorstudie: C-x-t-Protokoll

Ausgangskonzentration: C-x-t-Protokoll

Hauptstudie: C-x-t-Protokoll

Versuchstiere und Tierhaltung

Diskussion und Auswertung der Ergebnisse

Definition

Anlage 1 C-x-t-Protokoll

Abbildung 1 Hypothetische Darstellung einer Konzentrations-Zeit-Mortalitäts-Beziehung bei Ratten

B.3 Akute Toxizität (dermal)

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Bezugssubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Vorbereitung

1.6.2 Prüfbedingungen

1.6.2.1 Versuchstiere

1.6.2.2 Anzahl und Geschlecht

1.6.2.3 Dosierungen

1.6.2.4 Limit-Test

1.6.2.5 Beobachtungszeitraum

1.6.3 Versuchsdurchführung

2. Daten

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Bewertung und Interpretation

4. Literatur

B.4 Akute Hautreizung/-verätzung

Prinzip der In-vivo-Prüfung

Vorbereitung der In-vivo-Prüfung

Auswahl von Versuchstierarten

Vorbereitung der Versuchstiere

Haltungs- und Fütterungsbedingungen

Applikation der Prüfchemikalie

Vorversuch (Invivo-Prüfung auf Hautreizung/-verätzung an einem Tier)

Bestätigungsprüfung (Invivo-Prüfung auf hautreizende Wirkungen an zusätzlichen Tieren)

Beobachtungszeitraum

Klinische Beobachtungen und Bewertung von Hautreaktionen

Auswertung der Ergebnisse

Begründung für die Invivo-Prüfung

Diskussion der Ergebnisse

Schlussfolgerungen

Tabelle Bewertung von Hautreaktionen

Anlage Begriffsbestimmungen

B.5 Akute Augenreizung/-verätzung

Prinzip des In-vivo-Tests

Vorbereitung des In-vivo-Tests

Auswahl der Tierart

Vorbereitung der Versuchstiere

Haltungs- und Fütterungsbedingungen

Verwendung topischer Anästhetika und systemischer Analgetika

Applikation der Prüfchemikalie

Ausspülen

Vorversuch (In-vivo-Test auf Augenreizung/-verätzung an einem einzigen Tier)

Bestätigungstest (In-vivo-Test auf augenreizende Wirkungen an zusätzlichen Tieren)

Beobachtungszeitraum

Klinische Beobachtungen und Einstufung von Augenreaktionen

Ergebnisauswertung

Begründung für den In-vivo-Test

Prüfchemikalie

Vehikel

Versuchstiere

Anästhetika und Analgetika

Ergebnisse

Diskussion der Ergebnisse

Interpretation der Ergebnisse

Ergänzung zur Prüfmethode B.5

Tabelle 1 Einstufung von Augenschädigungen

Anlage Definitionen

Sequenzielle Strategie für die Prüfung auf Augenreizungen und Augenverätzungen

Allgemeine Überlegungen

Beschreibung der stufenweisen Prüfstrategie

Prüf- und Bewertungsstrategie: Augenreizung/-verätzung

B.6 Sensibilisierung der Haut

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Bezugssubstanzen

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.5 Beschreibung der Prüfmethoden

1.5.1 Meerschweinchen-Maximierungstest (GPMT)

1.5.1.1 Vorbereitungen

1.5.1.2 Versuchsbedingungen

1.5.1.2.1 Versuchstiere

1.5.1.2.2 Anzahl und Geschlecht

1.5.1.2.3 Dosierungen

1.5.1.3 Versuchsdurchführung

1.5.1.3.1 Induktion

1.5.1.3.2 Provokation

1.5.1.3.3 Beobachtung und Bewertung: behandelte Gruppe und Kontrollgruppe

1.5.2 Bühler-Test

1.5.2.1 Vorbereitungen

1.5.2.2 Versuchsbedingungen

1.5.2.2.1 Versuchstiere

1.5.2.2.2 Anzahl und Geschlecht

1.5.2.2.3 Dosierungen

1.5.2.3 Versuchsdurchführung

1.5.2.3.1 Induktion Tag 0 - behandelte Gruppe

1.5.2.3.2 Provokation

1.5.2.3.3 Beobachtung und Bewertung

2. Daten (GPMT und Bühlertest)

3. Abschlussbericht (GPMT und Bühlertest)

4. Literatur

Tabelle Bewertungsskala nach Magnusson/Kligman für Reaktionen auf Provokations-Läppentests

B.7 28-Tage-Toxizitätsstudie mit wiederholter oraler Verabreichung an Nagetieren

Auswahl von Versuchstierarten

Haltung und Fütterung

Vorbereitung der Tiere

Herstellung der Dosen

Zahl und Geschlecht der Versuchstiere

Limit-Test

Verabreichung der Dosen

Körpergewicht und Futter-/Trinkwasseraufnahme

Hämatologische Untersuchung

Klinisch-biochemische Untersuchungen

Makroskopische Untersuchung

Histopathologie

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Empfohlene Endpunkte für den Nachweis endokriner Disruptoren in dieser Prüfmethode b.7

B.8 Prüfung auf subakute Toxizität nach Inhalation - 28-Tage-Test

Zusammenfassung

Auswahl von Versuchstierarten

Vorbereitung der Tiere

Satellitenstudie (Reversibilität)

Kontrolltiere

Verabreichung der Konzentrationen

Partikelgrößenverteilung

Vorbereitung der Prüfsubstanz in einem Vehikel

Luftstrom in der Inhalationskammer

Temperatur und relative Luftfeuchtigkeit in der Inhalationskammer

Prüfsubstanz: nominale Konzentration

Prüfsubstanz: tatsächliche Konzentration

Prüfsubstanz: Partikelgrößenverteilung

Futter- und Wasseraufnahme

Klinische Pathologie

Tabelle 1: Klinische Standardpathologieparameter

Makroskopische Pathologie und Organgewichte

Tabelle 2: Bei der Nekropsie aufbewahrte Organe und Gewebe

Histopathologie

Versuchstiere und Tierhaltung

Diskussion und Auswertung der Ergebnisse

Anlage 1 Definition

B.9 Toxizität nach 28-tägiger Gabe (dermal)

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Bezugssubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Vorbereitung

1.6.2 Versuchsbedingungen

1.6.2.1 Versuchstiere

1.6.2.2 Anzahl und Geschlecht

1.6.2.3 Dosierungen

1.6.2.4 Limit-Test

1.6.2.5 Beobachtungszeitraum

1.6.3 Versuchsdurchführung

1.6.4 Autopsie

1.6.5 Histopathologische Untersuchungen

2. Daten

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Bewertung und Interpretation

4. Literatur

B.10 In-vitro-Test auf Chromosomenaberrationen in Säugetierzellen

Ausgangsüberlegungen und Grenzen

Tabelle 1 Zur Beurteilung der Eignung des Labors und zur Wahl der Positivkontrollen empfohlene Referenzchemikalien

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Formeln zur Bewertung der Zytotoxizität

B.11 Test auf Chromosomenaberrationen in Knochenmarkzellen von Säugetieren

Überprüfung der Eignung des Labors

Tabelle 1 Beispiele für Positivkontrollchemikalien

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Faktorielles Modell zur Ermittlung geschlechtsspezifischer Differenzen beim In-vivo-Test auf Chromosomenaberrationen

B.12 Erythrozyten-Mikrokerntest bei Säugern

Überprüfung der Eignung des Labors

Tabelle 1 Beispiele für Positivkontrollchemikalien

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Faktorieller Versuchsplan zur Ermittlung geschlechtsspezifischer Unterschiede beim In-vivo-Mikrokerntest

B.13./14. Mutagenität - Rückmutationstest unter Verwendung von Bakterien

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Ausgangsüberlegungen

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.5 Beschreibung der Prüfmethode

1.5.1 Vorbereitungen

1.5.1.1 Bakterien

1.5.1.2 Medium

1.5.1.3 Stoffwechselaktivierung

1.5.1.4 Prüfsubstanz/Zubereitung

1.5.2 Prüfbedingungen

1.5.2.1 Versuchsstämme (siehe 1.5.1.1)

1.5.2.2 Expositionskonzentrationen

1.5.2.3 Negativ- und Positivkontrollen

1.5.3 Verfahren

1.5.4 Inkubation

2. Daten

2.1 Aufbereitung der Ergebnisse

2.2 Bewertung und Interpretation der Ergebnisse

3. Abschlussbericht

4. Literaturhinweise

B.15 (gestrichen)

B.16 (gestrichen)

B.17 In vitro-Genmutationsprüfung an Säugetierzellen anhand des HPRT- und des XPRT-Gens

Vorbereitung der Prüfchemikalie

Ausgangsüberlegungen und Begrenzungen

Prinzip der Prüfmethode

Beschreibung der Prüfmethode

Vorbereitungen

Medien und Kulturbedingungen

Vorbereitung der Kulturen

Stoffwechselaktivierung

Lösungsmittel

Messung der Zytotoxizität und Auswahl der Expositionskonzentrationen

Kontrollen

Tabelle 1: Zur Beurteilung der Eignung des Labors und zur Wahl der Positivkontrollen empfohlene Referenzstoffe

Behandlung mit der Prüfchemikalie

Expressionszeit des Phänotyps und Messung der Mutationshäufigkeit

Kompetenz des Labors

Historische Kontrolldaten

Daten und Berichterstattung

Darstellung der Prüfergebnisse

Beurteilung und Auswertung

Anlage 1 - Begriffsbestimmungen

Anlage 2 - Formeln zur Bewertung der Zytotoxizität und der Mutantenhäufigkeit

B.18 (gestrichen)

B.19 (gestrichen)

B.20 (gestrichen)

B.21 In-vitro-Zelltransformationstest

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Bezugssubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

2. Daten

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation

4. Literatur

B.22 Dominantletal-Prüfung an Nagern

Prinzip der Prüfmethode

Beschreibung der Prüfmethode

Vorbereitungen

Tabelle 1 Beispiele für Positivkontrollstoffe

Anzahl der Versuchstiere

Verabreichungsdauer und Paarungsintervalle

Dosierungen

Verabreichung der Dosen

Gewebeentnahme und -verarbeitung

Daten und Berichterstattung

Auswertung der Ergebnisse

Bewertung und Auswertung der Ergebnisse

Anlage 1 - Begriffsbestimmungen

Anlage 2 - Zeitlicher Ablauf der Spermatogenese bei Säugetieren

Abb. 1: Übersicht über die Dauer (in Tagen) der Entwicklung männlicher Keimzellen bei Mäusen und Ratten und beim Menschen.

B.23 Spermatogonien-Prüfung auf Chromosomenaberrationen bei Säugetieren

Prinzip der Prüfmethode

Überprüfung der Eignung des Labors

Beschreibung der Prüfmethode

Vorbereitungen

Prüfbedingungen - Lösungsmittel/Vehikel

Tabelle 1 Beispiele für Positivkontrollstoffe

Anzahl der Versuchstiere

Behandlungsplan

Dosierungen

Verabreichung der Dosen

Anmerkungen

Chromosomenpräparation

Analyse

Daten und Berichterstattung

Behandlung der Ergebnisse

Beurteilung und Auswertung

Anlage 1 - Begriffsbestimmungen

B.24 (gestrichen)

B.25 In-vivo-Säuger-Translokationstest

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Bezugssubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

2. Daten

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation

4. Literatur

B.26 Prüfung auf subchronische orale Toxizität - 90-Tage-Toxizitätsstudie bei wiederholter oraler Verabreichung an Nagetieren

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Prinzip der Methode

1.4 Beschreibung der Methode

1.4.1 Vorbereitung der Tiere

1.4.2 Zubereitung der Dosen

1.4.3 Prüfbedingungen

1.4.3.1 Versuchstiere

1.4.3.2 Zahl und Geschlecht der Versuchstiere

1.4.3.3 Dosierung

1.4.3.4 Limit-Test

1.5 Versuchsdurchführung

1.5.1 Verabreichung der Dosen

1.5.2 Beobachtungen

1.5.2.1 Körpergewicht und Futter-/Wasseraufnahme

1.5.2.2 Hämatologische und klinischbiochemische Untersuchungen

1.5.2.3 Autopsie

1.5.2.4 Histopathologische Untersuchungen

2. Daten und Berichterstattung

2.1 Daten

2.2 Prüfbericht

2.2.1 Prüfsubstanz

2.2.2 Versuchstierart

2.2.3 Prüfbedingungen

2.2.4 Ergebnisse

3. Literatur

B.27 Prüfung auf subchronische orale Toxizität - 90-Tage-Toxizitätsstudie bei wiederholter oraler Verabreichung an Nicht-Nagetieren

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Prinzip der Methode

1.4 Beschreibung der Methode

1.4.1 Auswahl von Versuchstierarten

1.4.2 Vorbereitung der Tiere

1.4.3 Zubereitung der Dosen

1.5 Versuchsdurchführung

1.5.1 Zahl und Geschlecht der Versuchstiere

1.5.2 Dosierung

1.5.3 Limit-Test

1.5.4 Verabreichung der Dosen

1.5.5 Beobachtungen

1.5.5.1 Körpergewicht und Futter-/Wasseraufnahme

1.5.5.2 Hämatologische und klinisch-biochemische Untersuchungen

1.5.5.3 Autopsie

1.5.5.4 Histopathologische Untersuchungen

2. Daten und Berichterstattung

2.1 Daten

2.2 Prüfbericht

2.2.1 Prüfsubstanz

2.2.2 Versuchstierart

2.2.3 Prüfbedingungen

2.2.4 Ergebnisse

B.28 Prüfung auf subchronische Toxizität nach dermaler Applikation - 90-Tage-Test mit Nagern

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Bezugssubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

2. Daten

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation

4. Literatur

B.29 Prüfung auf sub-chronische Toxizität nach Inhalation - 90-Tage-Test

Zusammenfassung

Toxizitätsstudien

Futter- und Wasseraufnahme

Klinische Pathologie

Tabelle 1: Klinische Standardpathologieparameter

Ophthalmologische Untersuchung

Makroskopische Pathologie und Organgewichte

Tabelle 2: Bei der Nekropsie aufbewahrte Organe und Gewebe

Histopathologie

Anlage 1 Definition

B.30 Prüfung auf chronische Toxizität

Anlage 1 Definition

B.31 Studie zur Prüfung auf pränatale Entwicklungstoxizität

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Referenzstoff

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.5 Beschreibung der Prüfmethode

1.5.1 Auswahl der Versuchstierarten

1.5.2 Haltung und Fütterung

1.5.3 Vorbereitung der Tiere

1.6 Verfahren

1.6.1 Anzahl und Geschlecht der Versuchstiere

1.6.2 Zubereitung der Dosen

1.6.3 Dosierung

1.6.4 Limit-Test

1.6.5 Verabreichung der Dosen

1.6.6 Beobachtung der Muttertiere

1.6.7 Körpergewicht und Futteraufnahme

1.6.8 Autopsie

1.6.9 Untersuchung des Uterusinhalts

1.6.10 Untersuchung der Feten

2. Daten

2.1 Verarbeitung der Ergebnisse

2.2 Bewertung der Ergebnisse

2.3 Interpretation der Ergebnisse

3. Berichterstattung

3.1 Prüfbericht

4. Literaturhinweise

B.32 Prüfung auf Kanzerogenität

Anlage 1 Definition

B.33 Kombinierte Studien zur Prüfung auf chronische Toxizität und Kanzerogenität

Beobachtungen (Chronische Toxizitätsphase)

Beobachtungen (Kanzerogenitätsphase)

Daten und Berichterstattung (Kanzerogenität und chronische Toxizität)

Beschreibung der Methoden

Anlage 1 Definition

B.34 Prüfung auf Reproduktionstoxizität während einer Generation

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Bezugssubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

2. Daten

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation

4. Literatur

B.35 Zweigenerationenstudie zur Prüfung auf Reproduktionstoxizitat

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Prinzip der Prüfmethode

1.3 Beschreibung der Prüfmethode

1.3.1 Auswahl der Versuchstierarien

1.3.2 Haltung und Fütterung

1.3.3 Vorbereitung der Tiere

1.4 Verfahren

1.4.1 Anzahl und Geschlecht der Versuchstiere

1.4.2 Zubereitung der Dosen

1.4.3 Dosierung

1.4.4 Limit-Test

1.4.5 Verabreichung der Dosen

1.4.6 Versuchsablauf

1.4.7 Verpaarung

1.4.7.1 Verpaarung der Elterngeneration (P)

1.4.7.2 Verpaarung der F₁-Generation

1.4.7.3 Zweite Verpaarung

1.4.7.4 Wurfgröße

1.5 Beobachtungen

1.5.1 Klinische Beobachtungen

1.5.2 Körpergewicht und Futter-/Wasseraufnahme der Elterntiere

1.5.3 Östruszyklus

1.5.4 Spermienparameter

1.5.5 Nachkommen

1.5.6 Nekropsie

1.5.7 Organgewichte

1.5.8 Histopathologische Untersuchungen

1.5.8.1 Elterntiere

1.5.8.2 Entwöhnte Tiere

2. Daten

2.1 Verarbeitung der Ergebnisse

2.2 Bewertung der Ergebnisse

2.3 Interpretation der Ergebnisse

3. Berichterstattung

3.1 Prüfbericht

4. Literaturhinweise

B.36 Toxikokinetik

Zusätzliche Methoden

Alternative Expositionswege

Anlage Definitionen

B.37 Verzögerte Neurotoxizität phosphororganischer Substanzen nach akuter Exposition

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.5 Beschreibung der Prüfmethode

1.5.1 Vorbereitungen

1.5.2 Prüfbedingungen

1.5.2.1 Versuchstiere

1.5.2.2 Anzahl und Geschlecht

1.5.2.3 Dosierungen

1.5.2.4 Limit-Test

1.5.2.5 Beobachtungszeitraum

1.5.3 Versuchsdurchführung

1.5.3.1 Allgemeine Beobachtungen

1.5.3.2 Körpergewicht

1.5.3.3 Biochemische Untersuchungen

1.5.3.4 Autopsie

1.5.3.5 Histopathologische Untersuchung

2. Daten

3. Abschlussbericht

3.3 Ergebnisse:

4. Literatur

B.38 Verzögerte Neurotoxizität phosphororganischer Substanzen bei wiederholter Gabe über 28 Tage

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Prüfmethode

1.4 Beschreibung der Prüfmethode

1.4.1 Vorbereitungen

1.4.2 Prüfbedingungen

1.4.2.1 Versuchstiere

1.4.2.2 Anzahl und Geschlecht

1.4.2.3 Dosierungen

1.4.2.4 Limit-Test

1.4.2.5 Beobachtungszeitraum

1.4.3 Versuchsdurchführung

1.4.3.1 Allgemeine Beobachtungen

1.4.3.2 Körpergewicht

1.4.3.3 Biochemische Untersuchungen

1.4.3.4 Autopsie

1.4.3.5 Histopathologische Untersuchung

2. Daten

3. Abschlussbericht

4. Literatur

B.39 In-vivo-Test zur unplanmäßigen DNA-Synthese (UDS) in Säugetierleberzellen

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Prüfmethode

1.4 Beschreibung der Prüfmethode

1.4.1 Vorbereitungen

1.4.1.1 Versuchstiere

1.4.1.2 Haltungs- und Fütterungsbedingungen

1.4.1.3 Vorbereitung der Tiere

1.4.1.4 Prüfsubstanz/Vorbereitung

1.4.2 Prüfbedingungen

1.4.2.1 Lösungsmittel/Vehikel

1.4.2.2 Kontrollen

1.5 Verfahren

1.5.1 Anzahl und Geschlecht der Tiere

1.5.2 Behandlungsplan

1.5.3 Dosierungen

1.5.4 Limit-Test

1.5.5 Verabreichung

1.5.6 Präparation der Leberzellen

1.5.7 Bestimmung der UDS

1.5.8 Analyse

2. Daten

2.1 Aufbereitung der Ergebnisse

2.2 Bewertung und Interpretation der Ergebnisse

3. Abschlussbericht

4. Literaturhinweise

B.40 In vitro-Hautverätzung: TER-Prüfmethode

Prinzip der Prüfmethode

Nachweis der Leistungfähigkeit

Tabelle 1 Liste der Leistungsstoffe

Versuchstiere

Gewinnung der Hautstücke

Applikation der Prüfchemikalie und Kontrollstoffe

TER-Messungen

Farbbindungsmethoden

Anwendung und Entfernung von Sulforhodamin-B-Farbstoff

Berechnung des Farbgehalts

Auswertung der Ergebnisse

Daten und Berichterstattung

Abbildung 1 Apparatur Für Die Ter-Prüfung Mit Rattenhaut

Abbildung 2 Abmessungen Der Polytetrafluorethylen- (PTFE-) und Rezeptorrohre und Der Verwendeten Elektroden

Anlage - Begriffsbestimmungen

B.40.bis Invitro-Prüfung auf hautätzende Wirkung: Prüfmethode mit rekonstruierter humaner Epidermis (RHE)

Prinzip der Prüfmethode

Nachweis der Leistungfähigkeit

Tabelle 1 Liste der Leistungsstoffe

Elemente der RHE-Prüfmethode

Allgemeine Bedingungen

Funktionale Bedingungen

Tabelle 2 Akzeptanzspannen für OD-Werte der Negativkontrolle zur Kontrolle der Chargenqualität

Tabelle 3 Chargenfreigabekriterien im Rahmen der Qualitätskontrolle

Applikation der Prüf- und Kontrollchemikalien

Zellviabilitätsmessungen

Auswertung der Ergebnisse und Prädiktionsmodell

Tabelle 4 Vorhersagemodell EpiSkin^TM

Tabelle 5 EpiDerm^TM SCT, SkinEthic^TM RHE und epiCS®

Daten und Berichterstattung

Anlagen

Anlage 1 - Begriffsbestimmungen

Anlage 2 - Hauptelemente der für die Prüfung von Hautverätzungen validierten RHE-Prüfmodelle

Anlage 3 - Leistung der Prüfmodelle zur Unterkategorisierung

Anlage 4 - Schlüsselparameter und Akzeptanzkriterien für die Qualifizierung eines HPLC/UPLC-Spektrophotometriesystems zur Messung von aus RhE-Gewebe extrahiertem MTT-Formazan

B.41 In-vitro-3T3-NRU-Fototoxizitätstest

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Testmethode

1.4 Beschreibung der Testmethode

1.4.1 Zubereitungen

1.4.1.1 Zellen

1.4.1.2 Medien und Kulturbedingungen

1.4.1.3 Ansetzen der Kulturen

1.4.1.4 Zubereitung der Testsubstanzen

1.4.1.5 Bestrahlungsbedingungen

1.4.1.5.1 Lichtquelle

1.4.1.5.2 Dosimetrie

1.4.2 Testbedingungen

1.4.2.1 Konzentrationen der Testsubstanz

1.4.2.2 Kontrollen

1.4.2.2.1 Strahlungsempfindlichkeit der Zellen, Ermittlung historischer Daten

1.4.2.2.2 Strahlungsempfindlichkeit, Kontrolle des laufenden Tests

1.4.2.2.3 Viabilität der Lösemittelkontrollen

1.4.2.2.4 Positivkontrolle

1.4.3 Testverfahren

1.4.3.1 l. Tag

1.4.3.2 2. Tag

1.4.3.3 3. Tag

1.4.3.3.1 Mikroskopische Evaluierung

1.4.3.3.2 Neutralrot-Aufnahme-Test

2. Daten

2.1 Qualität und Quantität der Daten

2.2 Ergebnisbewertung

2.3 Interpretation der Ergebnisse

Tabelle 1

2.4 Interpretation der Daten

3. Berichterstattung

4. Literaturhinweise

Anlage 1 Rolle des 3T3 NRU-PT in einer sequenziellen Prüfstrategie für Fototoxizitätstests von Chemikalien

Anlage 2

Abbildung 1 Spektrale Leistungsverteilung eines gefilterten Solarsimulators

Abbildung 2 Bestrahlungsempfindlichkeit von Balb/c-3T3-Zellen (im UVA-Bereich gemessen)

B.42 Hautsensibilisierung: Lokaler Lymphknotentest

Tabelle 1: Erythem-Klassifizierung

Berechnung der Ergebnisse

Anlage 1

I. Wesentliche Elemente der Prüfmethode

II. Mindestliste der Referenzsubstanzen

Tabelle 1 Empfohlene chemische Rreferenzsubstanzen für die Leistungsstandards des LLNA

III. Vorgegebene Zuverlässigkeits- und Genauigkeitsstandards

Anlage 2 Begriffsbestimmungen

B.43 Prüfung auf Neurotoxizität bei Nagetieren

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Prinzip der Prüfmethode

1.4 Beschreibung der Prüfmethode

1.4.1 Auswahl der Tierspezies

1.4.2 Haltung und Fütterung

1.4.3 Vorbereitung der Versuchstiere

1.4.4 Verabreichungsweg und Vorbereitung der Testsubstanz

1.5 Versuchsdurchführung

1.5.1 Anzahl und Geschlecht der Tiere

1.5.2 Behandlungs- und Kontrollgruppe

1.5.3 Überprüfung der Zuverlässigkeit

1.5.4 Wahl der Dosierungen

1.5.5 Limit-Test

1.5.6 Verabreichung der Dosen

1.6 Beobachtungen

1.6.1 Häufigkeit der Beobachtungen und Untersuchungen

1.6.1.1 Beobachtungen zum allgemeinen Gesundheitszustand und zur Mortalität/Morbidität

1.6.1.2 Detaillierte klinische Beobachtungen

1.6.1.3 Funktionstests

1.6.2 Körpergewicht und Futter-/Trinkwasserverbrauch

1.6.3 Ophthalmologie

1.6.4 Hämatologie und klinische Biochemie

1.6.5 Histopathologie

2. Daten

2.1 Behandlung der Ergebnisse

2.2 Auswertung und Interpretation der Ergebnisse

3. Bericht

3.1 Prüfbericht

4. Literatur

Tabelle 1: Benötigte Mindestanzahl der Tiere pro Gruppe, abhängig davon, ob die Prüfung auf Neurotoxizität als Einzelstudie oder in Verbindung mit anderen Studien durchgeführt wird

Tabelle 2: Häufigkeit der klinischen Beobachtungen und Funktionstests

B.44 Hautresorption: In-vivo-Methode

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Prüfmethode

1.4 Beschreibung der Testmethode

1.4.1 Auswahl von Versuchstierarten

1.4.2 Zahl und Geschlecht der Versuchstiere

1.4.3 Unterbringungs- und Fütterungsbedingungen

1.4.4 Präparation der Tiere

1.4.5 Testsubstanz

1.4.6 Testpräparation

1.4.7 Aufbringen auf die Haut

1.4.8 Dauer der Exposition und Probenahme

1.4.9 Abschließende Schritte

1.4.10 Analyse

2. Daten

3. Berichterstattung

3.1 Abschlussbericht

4. Literaturhinweise

Abbildung 1 Beispiel für die Gestaltung einer typischen Vorrichtung zur Begrenzung und zum Schutz der dermalen Applikationsstelle bei In-vivo-Studien zur perkutanen Resorption

B.45 Hautresorption: In-vitro-Methode

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Prüfmethode

1.4 Beschreibung der Prüfmethode

1.4.1 Diffusionszelle

1.4.2 Rezeptorflüssigkeit

1.4.3 Herstellung der Hautstücke

1.4.4 Intakte Beschaffenheit des hergestellten Hautstücks

1.4.5 Testsubstanz

1.4.6 Testpräparation

1.4.7 Konzentrationen und Formulierungen von Testsubstanzen

1.4.8 Aufbringen auf die Haut

1.4.9 Temperatur

1.4.10 Dauer der Exposition und Probenahme

1.4.11 Abschließende Schritte

1.4.12 Analyse

2. Daten

3. Berichterstattung

3.1 Abschlussbericht

4. Literaturhinweise

Abbildung 1 Beispiel für den typischen Aufbau einer statischen Diffusionszelle für perkutane In-vitro-Resorptionsstudien

B.46 In vitro-Hautreizung: Prüfmethode Mit rekonstruierter humaner Epidermis

Ausgangsüberlegungen und Begrenzungen

Prinzip der Prüfmethode

Nachweis der Leistungsfähigkeit

Tabelle 1 Leistungsstoffe

Elemente der RHE-Prüfmethode

Allgemeine Bedingungen

Funktionale Bedingungen

Tabelle 2 Akzeptanzbereiche für OD-Werte der Negativkontrolle der Prüfmodelle dieser Prüfmethode

Tabelle 3 Beispiele für Chargenfreigabekriterien der Prüfmodelle dieser Prüfmethode im Rahmen der Qualitätskontrolle

Applikation der Prüf- und Kontrollchemikalien

Zellviabilitätsmessungen

Auswertung der Ergebnisse und Prädiktionsmodell

Daten und Berichterstattung

Prüfverfahren:

Akzeptanzkriterien für Prüfläufe und Prüfungen:

Anlage 1 - Begriffsbestimmungen

Anlage 2 - Prüfmodelle dieser Prüfmethode

Anlage 3 - Spezifische Protokollparameter der einzelnen Prüfmodelle dieser Prüfmethode

Anlage 4 - Schlüsselparameter und Akzeptanzkriterien für die Qualifizierung eines HPLC/UPLC-Spektrophotometriesystems zur Messung von aus RHE-Geweben extrahiertem MTT-Formazan

B.47 Trübungs- und Durchlässigkeitstest an der Rinderhornhaut zwecks Identifizierung von i) Chemikalien, die schwere Augenschäden verursachen, und ii) Chemikalien, die keine Einstufung als augenreizend oder schwer augenschädigend erfordern

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Vorhersagefähigkeit der BCOP-Prüfmethode

Tabelle 1 Vorhersagefähigkeit der BCOP-Prüfmethode für die Ermittlung von Chemikalien, die schwere Augenschäden verursachen

Tabelle 2 Vorhersagefähigkeit der BCOP-Prüfmethode für die Ermittlung von Chemikalien, die keine Einstufung als augenreizend oder schwer augenschädigend erfordern ("Stoffe ohne Reizwirkung")

Anlage 3 Leistungschemikalien für die BCOP-Prüfmethode

Tabelle 1 Empfohlene Chemikalien für den Nachweis der technischen Kompetenz von Laboratorien zur Durchführung des BCOP-Tests

Anlage 4 BCOP-Hornhauthalter

Anlage 5 Opazimeter

B.48 Test am isolierten Hühnerauge zur Identifizierung von i) Chemikalien, die schwere Augenschäden verursachen, und ii) Chemikalien, die keine Einstufung als augenreizend oder schwer augenschädigend erfordern

Tabelle 1 Hornhauttrübungswerte

Tabelle 2 Fluorescein-Verfärbungswerte

Tabelle 3 Kriterien für die Einstufung in ICE-Klassen - Hornhautschwellung

Tabelle 4 Kriterien für die Einstufung in ICE-Klassen - Hornhauttrübung

Tabelle 5 Kriterien für die Einstufung in ICE-Klassen - mittlere Fluorescein-Verfärbung

Tabelle 6In-vitro-Gesamtklassifizierung

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Leistungschemikalien für den ICE

Tabelle 1 Empfohlene Chemikalien für den Nachweis der technischen Kompetenz von Laboratorien zur Durchführung des ICE-Tests

Anlage 3 Schaubilder des ICE-Superfusionsgeräts und der ICE-Augenklemmen

B.49 In-vitro-Mikronukleustest an Säugetierzellen

Tabelle 1 Zur Beurteilung der Eignung des Labors und zur Wahl der Positivkontrollen empfohlene Referenzchemikalien

Tabelle 2 Zellbehandlung und Entnahmezeitpunkte beim MNvit-Test

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Formeln zur Bewertung der Zytotoxizität

B.50 Hautsensibilisierung: Lokaler Lymphknotentest: DA

Berechnung der Ergebnisse

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

B.51 Hautsensibilisierung: Lokaler Lymphknotentest: BRDU-ELISA

Berechnung der Ergebnisse

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

B.52 Akute Inhalationstoxizität - Akut-toxische Klassenmethode

Anlage 1 Definition

Anlage 2 Verfahrensweise für jede Startkonzentration von Gasen (ppm/4 Std.)

Anlage 2a Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 100 ppm/4 Std. für Gase

Anlage 2b Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 500 ppm/4 Std. für Gase

Anlage 2c Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 2.500 ppm/4 Std. für Gase

Anlage 2d Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 20.000 ppm/4 Std. für Gase

Anlage 3 Verfahrensweise für jede Startkonzentration von Dämpfen (mg/l/4 Std.)

Anlage 3a Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 0,5 mg/l/4 Std. für Dämpfe

Anhang 3b Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 2 mg/l/4 Std. für Dämpfe

Anlage 3c Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 10 mg/l/4 Std. für Dämpfe

Anlage 3d Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 20 mg/l/4 Std. für Dämpfe

Anlage 4 Verfahrensweise für jede Startkonzentration von Aerosolen (mg/l/4 Std.)

Anlage 4a Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 0.05 mg/l/4 Std. für Dämpfe

Anlage 4b Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 0,5 mg/l/4Std. für Aerosole

Anlage 4c Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 1 mg/l/4 Std. für Aerosole

Anlage 4d Akute Inhalationstoxizität: Prüfverfahren mit einer Ausgangskonzentration von 5 mg/l/4 Std. für Aerosole

B.53. Prüfung auf Entwicklungsneurotoxizität

Vorbereitungen für die Prüfung

Anlage 1 Beispiele

Anlage 2 Begriffsbestimmungen

B.54 Uterotropher Bioassay mit Nagern: Ein Kurzzeit-Screening-Test auf östrogene Eigenschaften

Auswahl der Versuchstierarten

Haltungs- und Fütterungsbedingungen

Vorbereitung der Tiere

Eignungsprüfung des Prüflabors

Zahl und Zustand der Versuchstiere

Alter der unreifen Tiere

Ovarektomieverfahren

Ausführungen zur Dosisfindung

Verabreichung der Dosen

Leitfaden für die Interpretation und Akzeptanz der Ergebnisse

Abbildung 1 Schematische Darstellung der operativen Entfernung der Ovarien

Abbildung 2 Entfernung und Vorbereitung der Uterusgewebe für die Gewichtsbestimmung

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Rahmenkonzept der OECD für die Testung und Bewertung endokriner Disruptoren

Anmerkungen zum Rahmenkonzept

B.55 Hershberger-Bioassay mit Ratten: Ein Kurzzeit-Screening-Test auf (Anti-)androgene Eigenschaften

Anmerkungen zum Rahmenkonzept

Berichterstattung

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Rahmenkonzept der OECD für die Testung und Bewertung endokriner Disruptoren

B.56 Erweiterte Ein-Generationen-Prüfung auf Reproduktionstoxizität

Ausgangsüberlegungen und Ziele

Beschreibung der Prüfmethode/Vorbereitungen für den Test

Beobachtungen am lebenden Tier

Abschliessende Beobachtungen

Berichterstattung

Anlage 1 Maßnahmen und Beobachtungen im Rahmen der FOB (Functional Observational Battery) (Kohorte 2A)

Anlage 2 Begriffsbestimmungen

B.57 H295R-Steroidgenese-Assay

Ausgangsüberlegungen und Grenzen

Kulturtechnik

Anforderungen an die Qualitätskontrolle

Verfahren der Chemikalienexposition

Datenanalyse und Berichterstattung

Anlage Begriffsbestimmungen

B.58 Genmutations-Assays an somatischen Zellen und Keimzellen transgener Nagetiere

Anlage Begriffsbestimmungen

B.59In-chemico-Hautsensibilisierung: Direkt-Peptidreaktivitätstest (DPRA)

Vorbemerkungen, Anwendbarkeit und Einsatzgrenzen

Tabelle 1 Vorhersagemodell Cystein 1:10/Lysin 1:50

Tabelle 2 Vorhersagemodell Cystein 1:10

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Leistungsstoffe

Tabelle 1 Empfohlene Leistungsstoffe für den Nachweis der technischen Kompetenz zur Durchführung des Direkt-Peptidreaktivitätstests

Anlage 3 Beispiele für die Analysesequenz

B.60In-vitro-Hautsensibilisierung: ARE-Nrf2 Luciferase-Prüfmethode

Vorbemerkungen, Anwendbarkeit und Einsatzgrenzen

Abbildung 1 Vorhersagemodell des KeratinoSens^TM-Tests. Eine KeratinoSens^TM-Vorhersage sollte im Rahmen eines IATa sowie gemäß den Nummern 9 und 11 in Betracht gezogen werden

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Leistungsstoffe

Tabelle 1 Empfohlene Stoffe zum Nachweis der technischen Leistungsfähigkeit beim KeratinoSens^TM-Test

Anlage 3 Qualitätskontrolle bei Lumineszenzmessungen

B.61 Fluorescein-Leckage-Prüfmethode zur Identifizierung von Stoffen mit augenverätzender und stark augenreizender Wirkung

Anlage 1 Diagramm von MDCK-Zellen, die auf einer Insertmembran für die FL-Prüfmethode kultiviert wurden

Anlage 2 Definitionen

Anlage 3 Leistungschemikalien für die FL-Prüfmethode

Tabelle 1 Empfohlene Chemikalien für den Nachweis der technischen Kompetenz von Laboratorien zur Durchführung des FL-Tests

B.62 Alkalischer In-vivo-Comet-Assay an Säugetierzellen

Überprüfung der Eignung des Labors

Tabelle 1 Beispiele für Positivkontrollstoffe und einige der jeweils zutreffenden Zielgewebe

Vorbereitung der Objektträger

Behandlungsplan

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Faktorieller Versuchsplan zur Ermittlung geschlechtsspezifischer Unterschiede beim In-vivo-Comet-Assay

Anlage 3 Gegenwärtige Einsatzgrenzen des Tests

B.63 Screening-Prüfung zur Bewertung der Reproduktions-/Entwicklungstoxizität

B.64 Kombinierte Screening-Prüfung mit wiederholter Verabreichung zur Bewertung der Reproduktions-/Entwicklungstoxizität

B.65 In-vitro-Prüfmethode zur Untersuchung der MembraN-Barriere auf Hautverätzungen

B.66 STTA-in-vitro-Assays zum Nachweis von Östrogenrezeptor-Agonisten und -Antagonisten

B.67 In-vitro-Genmutationsprüfung an Säugetierzellen anhand des Thymidinkinase-Gens

B.68 In-vitro-Prüfmethode mit Kurzzeitexposition zur Ermittlung von i) Chemikalien, die schwere Augenschäden verursachen, und ii) Chemikalien, die keine Einstufung als augenreizend oder schwer augenschädigend erfordern

B.69 Prüfmethode unter Verwendung von rekonstruiertem menschlichem hornhautartigem Epithel (RhCE) zur Ermittlung von Chemikalien, bei denen eine Einstufung und Kennzeichnung als augenreizend oder schwer augenschädigend nicht erforderlich ist

B.70 In-vitro-Assays mit einem humanen rekombinanten Östrogenrezeptor (hrER) zur Ermittlung von Chemikalien mit ER-Bindungsaffinität

B.71 In-vitro-Tests zur Sensibilisierung der Haut in Bezug auf den Schlüsselvorgang der Aktivierung von dendritischen Zellen auf dem Adverse Outcome Pathway (AOP) für die Sensibilisierung der Haut

Teil C Ökotoxizität

C.1 Akute Toxizität für Fische

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Reagenzien

1.6.1.1 Lösungen der Prüfsubstanzen

1.6.1.2 Hälterungs- und Verdünnungswasser

1.6.2 Geräte

1.6.3 Prüforganismen

1.6.3.1 Hälterung

1.6.3.2 Mortalität

1.6.4 Anpassung

1.6.5 Durchführung der Prüfung

2. Daten und Auswertung

3. Abschlussbericht

4. Literatur

Anlage 1 Zubereitetes Wasser

Anlage 2 Für die Prüfung empfohlene Fischarten

Anlage 3 Beispiel für eine Konzentrations-Mortalitätskurve

C.2 Daphnia-Sp.-Test auf akute Schwimmunfähigkeit

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Testmethode

1.4 Informationen zur Testsubstanz

1.5 Referenzsubstanzen

1.6 Qualitätskriterien

1.7 Beschreibung der Testmethode

1.7.1 Geräte

1.7.2 Testorganismen

1.7.3 Halte- und Verdünnungswasser

1.7.4 Testlösungen

1.8 Durchführung des Tests

1.8.1 Expositionsbedingungen

1.8.1.1 Testgruppen und Kontrollen

1.8.1.2 Testkonzentrationen

1.8.1.3 Inkubationsbedingungen

1.8.1.4 Testdauer

1.8.2 Beobachtungen

1.8.3 Analysemessungen

1.9 Limit-Test

2. Daten

3. Berichterstattung

3.1 Testbericht

4. Literaturhinweise

Anlage 1 Chemische Eigenschaften einer geeigneten Zusammensetzung von Verdünnungswasser

Anlage 2 Beispiele für geeignetes zubereitetes Testwasser

C.3 Süsswasseralgen und Cyanobakterien: Wachstumsinhibitionstest

Anwendbarkeit des Tests

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Stämme, die sich für den Test als geeignet erwiesen haben

Anlage 3 Nährmedien

Anlage 4 Beispiel eines Verfahrens zur Kultivierung der Algen

Anlage 5 Datenanalyse durch nichtlineare Regression

C.4 Biologische Abbaubarkeit - Bestimmung der "leichten" biologischen Abbaubarkeit

Teil I Allgemeines

I.1 Einleitung

I.2 Auswahl des geeigneten Verfahrens

Tabelle 1: Anwendbarkeit der Prüfverfahren

I.3 Referenzsubstanzen

I.4 Prinzip der Methode

I.5 Qualitätskriterien

I.5.1 Reproduzierbarkeit

I.5.2 Gültigkeit des Versuchs

I.6 Allgemeine Verfahren und Vorbereitungen

Tabelle 2: Prüfbedingungen

I.6.1 Verdünnungswasser

I.6.2 Stammlösungen von mineralischen Bestandteilen

I.6.3 Stammlösungen der Chemikalien

I.6.4 Inokula

I.6.4.1 Inokulum aus Belebtschlamm

I.6.4.2 Andere Quellen für das Inokulum

I.6.5 Vorbereitung der Inokula

I.6.6 Abiotische Kontrollen

I.6.7 Anzahl der Flaschen

I.7 Daten und Auswertung

I.7.1 Messung des Abbaus mittels DOC-Bestimmung

I.7.2 Messung des Abbaus mittels spezifischer Analytik

I.7.3 Abiotischer Abbau

I.8 Abschlussbericht

Teil II DOC-Dieaway-Test - Abnahme von gelöstem organischem Kohlenstoff (DOC) (Methode C.4-A)

II.1 Prinzip der Methode

II.2 Beschreibung der Methode

II.2.1 Geräte

II.2.2 Ansatz des mineralischen Mediums

II.2.3 Ansatz und Vorbereitung des Inokulums

II.2.4 Ansatz der Flaschen

II.2.5 Anzahl der Flaschen in einem typischen Durchgang

II.2.6 Durchführung der Prüfung

II.3 Daten und Abschlussbericht

II.3.1 Auswertung der Ergebnisse

II.3.2 Gültigkeit der Ergebnisse

II.3.3 Abschlussbericht

II.4 Datenblatt

Teil III Modifizierter OECD-Screening-Test (Methode C.4-B)

III.1 Prinzip der Methode

III.2 Beschreibung der Methode

III.2.1 Geräte

III.2.2 Ansatz des mineralischen Mediums

III.2.3 Ansatz und Vorbereitung des Inokulums

III.2.4 Ansatz der Flaschen

III.2.5 Anzahl der Flaschen in einem typischen Durchgang

III.2.6 Durchführung der Prüfung

III.3 Daten und Abschlussbericht

III.3.1 Auswertung der Ergebnisse

III.3.2 Gültigkeit der Ergebnisse

III.3.3 Prüfbericht

III.4 Datenblatt

Teil IV CO₂-Entwicklungstest (Methode C.4-C)

IV.1 Prinzip der Methode

IV.2 Beschreibung der Methode

IV.2.1 Geräte

IV.2.2 Ansatz des mineralischen Mediums

IV.2.3 Ansatz und Vorbereitung des Inokulums

IV.2.4 Ansatz der Flaschen

IV.2.5 Anzahl der Flaschen in einem typischen Durchgang

IV.2.6 Durchführung der Prüfung

IV.3 Daten und Abschlussbericht

IV.3.1 Auswertung der Ergebnisse

IV.3.2 Validität der Ergebnisse

IV.3.3 Abschlussbericht

IV.4 Datenblatt

Teil V Manometrischer Respirationstest (Methode C.4-D)

V.1 Prinzip der Methode

V.2 Beschreibung der Methode

V.2.1 Geräte

V.2.2 Ansatz des mineralischen Mediums

V.2.3 Ansatz und Vorbereitung des Inokulums

V.2.4 Ansatz der Flaschen

V.2.5 Anzahl der Flaschen in einem typischen Durchgang

V.2.6 Durchführung der Prüfung

V.3 Daten und Abschlussbericht

V.3.1 Auswertung der Ergebnisse

V.3.2 Gültigkeit der Ergebnisse

V.3.3 Abschlussbericht

V.4 Datenblatt

Teil VI Geschlossener Flaschentest (Methode C.4-E)

VI.1 Prinzip der Methode

VI.2 Beschreibung der Methode

VI.2.1 Geräte

VI.2.2 Ansatz des mineralischen Mediums

VI.2.3 Ansatz des Inokulums

VI.2.4 Ansatz der Flaschen

VI.2.5 Anzahl der Flaschen in einem typischen Ansatz

VI.2.6 Durchführung der Prüfung

VI.3 Daten und Abschlussbericht

VI.3.1 Auswertung der Ergebnisse

VI.3.2 Gültigkeit der Ergebnisse

VI.3.3 Abschlussbericht

VI.4 Datenblatt

Teil VII MITI-Test (Methode C.4-F)

VII.1 Prinzip der Methode

VII.2 Beschreibung der Methode

VII.2.1 Geräte

VII.2.2 Ansatz des mineralischen Mediums

VII.2.3 Ansatz des Inokulums

VII.2.4 Ansatz der Flaschen

VII.2.5 Durchführung der Prüfung

VII.3 Daten und Abschlussbericht

VII.3.1 Auswertung der Ergebnisse

VII.3.2 Gültigkeit der Ergebnisse

VII.3.3 Abschlussbericht

VII.4 Datenblatt

Anlage 1 Abkürzungen und Definitionen

Anlage 2 Berechnung und Bestimmung geeigneter Summenparameter

1. Kohlenstoffgehalt

2. Theoretischer Sauerstoffbedarf (ThSB)

3. Chemischer Sauerstoffbedarf (CSB)

4. Gelöster organischer Kohlenstoff (DOC)

Anlage 3 Bewertung der biologischen Abbaubarkeit von schwerlöslichen Substanzen

Anlage 4 Beurteilung der biologischen Abbaubarkeit von chemischen Substanzen, bei denen Verdacht auf Toxizität gegenüber dem Inokulum besteht

Anlage 5 Berücksichtigung der Sauerstoffaufnahme infolge Nitrifikation

C.5 Abbaubarkeit - Biochemischer Sauerstoffbedarf

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

2. Daten und Auswertung

3. Abschlussbericht

4. Literatur

C.6 Abbaubarkeit - Chemischer Sauerstoffbedarf

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

2. Daten und Auswertung

3. Abschlussbericht

4. Literatur

C.7 Abbaubarkeit - Abiotischer Abbau: Hydrolyse in Abhängigkeit vom pH-Wert

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Anwendungsbereich der Testmethode

1.4 Prinzip der Testmethode

1.5 Informationen zur Testsubstanz

1.6 Referenzsubstanzen

1.7 Qualitätskriterien

1.7.1 Wiederfindungsrate

1.7.2 Wiederholbarkeit und Empfindlichkeit der Analysemethoden

1.7.3 Konfidenzintervalle für Kinetikdaten der Hydrolyse

1.8 Beschreibung der Testmethode

1.8.1 Geräte und Apparatur

1.8.2 Applikation der Testsubstanz

1.8.3 Pufferlösungen

1.8.4 Testbedingungen

1.8.4.1 Testtemperatur

1.8.4.2 Licht und Sauerstoff

1.8.4.3 Testdauer

1.8.5 Durchführung des Tests

1.8.5.1 Vortest (Stufe 1)

1.8.5.2 Hydrolyse instabiler Substanzen (Stufe 2)

1.8.5.3 Feststellung der Hydrolyseprodukte (Stufe 3)

1.8.5.4 Zusätzliche Tests

2. Daten

2.1 Aufbereitung der Ergebnisse

2.2 Evaluierung und Interpretation der Ergebnisse

3. Abschlussbericht

3.1 Testbericht

4. Literatur

Anlage 1 Mehrstufiger Hydrolyse-Testablauf

Anlage 2 Definitionen und Einheiten

Anlage 3 Puffersysteme

A. CLARK and LUBS:

B. KOLTHOFF und VLEESCHHOUWER:

C. SÖRENSEN:

C.8 Toxizität für Regenwürmer

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definition und Messgröße

1.3 Referenzsubstanz

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Beschreibung des Prüfverfahrens

1.6.1 Material

1.6.1.1 Prüfsubstrat

1.6.1.2 Prüfgefäße

1.6.2 Prüfbedingungen

1.6.3 Prüfverfahren

1.6.4 Prüforganismen

2. Daten

2.1 Verarbeitung und Auswertung der Ergebnisse

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

4. Literatur

Anlage Anzucht und Haltung der Würmer vor der Prüfung

C.9 Biologische Abbaubarkeit

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Prüfverfahren

1.6.1 Vorbereitung

1.6.1.1 Reagenzien

1.6.1.2 Geräte

1.6.1.3 Vorbereitung des Inokulums

1.6.1.4 Zubereitung der Testlösungen

1.6.2 Durchführung der Prüfung

2. Daten und Auswertung

3. Schlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation der Ergebnisse

4. Literatur

Anlage Beispiel einer Auswertung

Abbildung 1 Beispiele von Abbau-Kurven

Abbildung 2 Beispiel für eine Adaptation des Schlammes

C.10 Simulation der aeroben Abwasserbehandlung

C.10-A: Belebtschlamm

Negative/positive Testergebnisse (Pass/Fail)

Reproduzierbarkeit von Testergebnissen

Beschreibung des Prüfverfahrens

Anlagen

Anlage 1

Abbildung 1 Apparatur zur Bestimmung der biologischen Abbaubarkeit

Abbildung 2 Apparatur zur Bestimmung der biologischen Abbaubarkeit

Abbildung 3 Einzelheiten des 3-Liter-,Porous-Pot'-Belüftungsgefäßes

Anlage 2 Beispiel einer Eliminationskurve

Anlage 3 [Zur Information]

Anlage 4 Beurteilung der Belebtschlamm-Inhibition

Anlage 5 Schwer wasserlösliche Prüfsubstanzen - flüchtige chemische Substanzen

Anlage 6 Auswirkungen der Schlammverweilzeit auf die Behandlungsfähigkeit chemischer Substanzen

Negative/positive Testergebnisse (Pass/Fail)

Referenzsubstanz

Reproduzierbarkeit von Testergebnissen

Anlage 6.1 ,Porous Pot' mit SRT-Kontrolle

Anlage 6.2 Berechnung von kinetischen Konstanten

Abbildung 1 Drei Temperaturen; fünf Schlammverweilzeiten (SRT)

Abbildung 2 Regressionsgerade SRT - S₁ vs S₁ bei Temperatur T = 5 °C

Anlage 7 Tests bei niedrigen (μg/l) Konzentrationsbereichen

C.10-B: Biofilme

Negative/positive Testergebnisse (Pass/Fail)

Reproduzierbarkeit von Testergebnissen

Beschreibung des Prüfverfahrens

Anlage 8

Abbildung 1 Drehrohre

Abbildung 2 Fließdiagramm

C.11 Belebtschlamm, Prüfung der Atmungshemmung (Kohlenstoff- und Ammoniumoxidation)

Validitätskriterien und Reproduzierbarkeit

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Messgeräte (Beispiele)

Anlage 3 Messgerät (Beispiel) mit einer BSB-Flasche

Anlage 4 Hemmkurven (Beispiel)

C.12 Biologische Abbaubarkeit
modifizierter SCAS-Test

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen und Einheiten

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Methode

1.5 Qualitätskriterien

1.6 Prüfverfahren

1.6.1 Vorbereitung

1.6.2 Prüfbedingungen

1.6.3 Durchführung der Prüfung

2. Daten und Auswertung

3. Abschlussbericht

3.1 Prüfbericht

3.2 Interpretation der Ergebnisse

4. Literatur

Anlage 1 SCAS-Test: Beispiel der Ergebniseingabe

Anlage 2 Beispiel der Testapparatur

C.13 Bioakkumulationsprüfung am Fisch mit aquatischer Exposition und Exposition über das Futter

C.13-I Biokonzentrationsprüfung am Fisch mit aquatischer Exposition

Angaben zum Prüfstoff

Gültigkeit des Tests

Prüfungsablauf

C.13-II Fischtest - Minimale aquatische Exposition

Probenahmeplan für minimierte Versuche

C.13-III Bioakkumulationstest an Fischen - Exposition über das Futter

Angaben zum Prüfstoff

Validität der Prüfung

Durchführung des Tests

Anlage 1 Definitionen und Einheiten

Anlage 2 Chemische Eigenschaften eines geeigneten Verdünnungswassers

Anlage 3 Für die Prüfung empfohlene Fischarten

Anlage 4 Probenahmepläne für Prüfungen mit aquatischer Exposition und mit Exposition über das Futter

1. Hypothetisches Beispiel eines Probenahmeplans für die vollständige Biokonzentrationsprüfung mit aquatischer Exposition eines Stoffs mit log K_OW = 4

2. Hypothetisches Beispiel eines Probenahmeplans für die Bioakkumulationsprüfung eines Stoffs mit Exposition über das Futter nach 10 Tagen Aufnahme und 42 Tagen Ausscheidung

Anlage 5 Allgemeine Berechnungen

1. Einleitung

2. Vorabschätzung der Dauer der Aufnahmephase

3. Vorabschätzung der Dauer der Ausscheidungsphase

4. Sequentielle Methode: Bestimmung der Ausscheidungs-(Eliminations-)konstanten k₂

5. Sequenzielle Methode: Bestimmung der Aufnahmekonstanten k₁ (nur bei aquatischer Exposition)

6. Simultane Methode für die Berechnung der Aufnahme- und der Ausscheidungskonstanten (nur bei aquatischer Exposition)

7. Korrektur um den Effekt der Verdünnung durch Wachstum zur Bestimmung des kinetischen BCF und des BMF

8. Normalisierung des Lipidgehalts auf 5 % (nur bei aquatischer Exposition)

Anlage 6 Gleichungen für den Versuch mit aquatischer Exposition: Minimierter Versuchsplan

Anlage 7 Gleichungen für die Prüfung mit Exposition über das Futter

1. Beispiel der Zusammensetzung eines geeigneten handelsüblichen Fischfutters

2. Beispiele für Futterdotierungstechniken

3. Berechnung der Assimilationseffizienz und des Biomagnifikationsfaktors

4. Korrektur um den Lipidgehalt

5. Bewertung der Unterschiede zwischen der gemessenen Konzentration zum Zeitpunkt Null (C_0,m) und der abgeleiteten Konzentration zum Zeitpunkt Null (C_0,d)

6. Empfehlungen für sehr schnell ausgeschiedene Prüfstoffe

Anlage 8 Ansätze zur Schätzung vorläufiger BCF-Werte anhand von Daten aus dem Versuch mit Exposition über das Futter

C.14 Wachstumstest an Jungfischen

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Prinzip der Prüfmethode

1.4 Angaben zur Prüfsubstanz

1.5 Validität des Tests

1.6 Beschreibung der Prüfmethode

1.6.1 Apparatur

1.6.2 Wasser

1.6.3 Testlösungen

1.6.4 Auswahl der Spezies

1.6.5 Haltung der Fische

1.7 Versuchsaufbau

1.7.1 Versuchsaufbau für die Regressionsanalyse

1.7.2 Versuchsaufbau für die Bestimmung der NOEC/LOEC mittels Varianzanalyse

1.8 Verfahren

1.8.1 Auswahl und Wiegen der Versuchsfische

1.8.2 Expositionsbedingungen

1.8.2.1 Dauer

1.8.2.2 Besatzrate und Besatzdichte

1.8.2.3 Fütterung

1.8.2.4 Licht und Temperatur

1.8.3 Testkonzentrationen

1.8.4 Kontrollen

1.8.5 Häufigkeit der analytischen Bestimmungen und Messungen

1.8.6 Anmerkungen

2. Daten und Berichterstattung

2.1 Behandlung der Ergebnisse

2.1.1 Analyse der Ergebnisse mittels Regression (Konzentrations-Wirkungs-Modell)

2.1.2 Analyse der Ergebnisse zur Bestimmung der LOEC

2.2 Interpretation der Ergebnisse

2.3 Testbericht

2.3.1 Prüfsubstanz:

2.3.2 Testspezies:

2.3.3 Prüfbedingungen:

2.3.4 Ergebnisse:

3. Literatur

Anlage 1 Für die Prüfung empfohlene Fischspezies und geeignete Prüfbedingungen

Anlage 2 Einige chemische Eigenschaften von geeignetem Verdünnungswasser

Anlage 3 Logarithmische Reihe geeigneter Konzentrationen für den Toxizitätstest

C.15 Fische, kurzfristige Toxizitätsprüfung an Embryonen und Jungfischen mit Dottersack

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Prinzip der Methode

1.4 Informationen über die Prüfsubstanz

1.5 Validitätskriterien

1.6 Beschreibung der Methode

1.6.1 Prüfkammern

1.6.2 Auswahl der Fischarten

1.6.3 Haltung der Zuchtfische

1.6.4 Handhabung von Embryonen und Larven

1.6.5 Wasser

1.6.6 Prüflösungen

1.7 Vorgehensweise

1.7.1 Expositionsbedingungen

1.7.1.1 Dauer

1.7.1.2 Besatz

1.7.1.3 Licht und Temperatur

1.7.2 Prüfkonzentrationen

1.7.3 Kontrollen

1.7.4 Häufigkeit von analytischen Bestimmungen und Messungen

1.7.5 Beobachtungen

1.7.5.1 Stadium der Embryonalenwicklung

1.7.5.2 Schlüpfen und Überleben

1.7.5.3 Abnormes Aussehen

1.7.5.4 Abnormes Verhalten

1.7.5.5 Länge

1.7.5.6 Gewicht

2. Daten und Berichterstattung

2.1 Auswertung der Ergebnisse

2.2 Interpretation der Ergebnisse

2.3 Abschlussbericht

2.3.1 Prüfsubstanz

2.3.2 Geprüfte Fischart

2.3.3 Prüfbedingungen

2.3.4 Ergebnisse

3. Literaturhinweise

Tabelle 1A Für die Prüfung empfohlene Fischarten

Tabelle 1B Beispiele für andere hinreichend dokumentierte Arten, die ebenfalls verwendet wurden

Anlage 1 Anleitung zur Durchführung einer Toxizitätsprüfung an Embryonen und Jungtieren mit Dottersack des Zebrabärblings (Brachydanio rerio)

Anlage 2 Prüfbedingungen, Dauer und Überlebenskriterien für empfohlene Fischarten

Anlage 3 Prüfbedingungen, Dauer und Überlebenskriterien für andere hinreichend dokumentierte Fischarten

Anlage 4 Verschiedene chemische Eigenschaften eines annehmbaren Verdünnungswassers

C.16 Honigbienen - Akute orale Toxizitätsprüfung

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Prinzip der Methode

1.4 Validitätskriterien

1.5 Beschreibung der Methode

1.5.1 Sammlung der Bienen

1.5.2 Unterbringungs- und Fütterungsbedingungen

1.5.3 Vorbereitung der Bienen

1.5.4 Herstellung der Dosen

1.6 Vorgehensweise

1.6.1 Prüf- und Kontrollgruppen

1.6.2 Toxischer Standard

1.6.3 Exposition

1.6.3.1 Verabreichung der Dosen

1.6.3.2 Dauer

1.6.4 Beobachtungen

1.6.5 Limit-Test

2. Daten und Berichterstattung

2.1 Daten

2.2 Prüfbericht

2.2.1 Prüfsubstanz

2.2.2 Geprüfte Bienenart

2.2.3 Prüfbedingungen

2.2.4 Ergebnisse

3. Literaturhinweise

C.17 Honigbienen - Akute Kontakttoxizitätsprüfung

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Prinzip der Methode

1.4 Validitätskriterien

1.5 Beschreibung der Methode

1.5.1 Sammlung der Bienen

1.5.2 Unterbringungs- und Fütterungsbedingungen

1.5.3 Vorbereitung der Bienen

1.5.4 Herstellung der Dosen

1.6 Vorgehensweise

1.6.1 Prüf- und Kontrollgruppen

1.6.2 Toxischer Standard

1.6.3 Exposition

1.6.3.1 Verabreichung der Dosen

1.6.3.2 Dauer

1.6.4 Beobachtungen

1.6.5 Limit-Test

2. Daten und Berichterstattung

2.1 Daten

2.2 Prüfbericht

2.2.1 Prüfsubstanz

2.2.2 Geprüfte Bienenart

2.2.3 Prüfbedingungen

2.2.4 Ergebnisse

3. Literaturhinweise

C.18 Adsorption/Desorption nach einer Schüttelmethode

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Anwendungsbereich

1.3 Begriffsbestimmungen und Einheiten

1.4 Prinzip der Testmethode

1.5 Angaben zur Testsubstanz

1.6 Anwendbarkeit des Tests

1.7 Beschreibung der Methode

1.7.1 Geräte und chemische Reagenzien

1.7.2 Charakterisierung und Auswahl von Böden

Tabelle 1: Anleitung zur Auswahl von Bodenproben zur Adsorption/Desorption

1.7.3 Sammlung und Lagerung von Bodenproben

1.7.3.1 Sammlung

1.7.3.2 Lagerung

1.7.3.3 Handhabung und Vorbereitung von Bodenproben auf den Test

1.7.4 Vorbereitung der Testsubstanz zur Anwendung auf Boden

1.8 Voraussetzungen für die Durchführung des Adsorptions-/Desorptionstests

1.8.1 Analysenmethode

1.8.2 Auswahl optimaler Boden-Lösungs-Verhältnisse

Abbildung 1: Beziehung zwischen Boden-Lösungs-Verhältnissen und K_d bei verschiedenen Anteilen adsorbierter Testsubstanz

1.9 Durchführung des Tests

1.9.1 Testbedingungen

1.9.2 Stufe 1 - Voruntersuchung

1.9.2.1 Auswahl optimaler Boden-Lösungs-Verhältnisse

1.9.2.2 Bestimmung der Zeit zur Einstellung des Adsorptionsgleichgewichts und der bei Gleichgewicht adsorbierten Menge Testsubstanz

1.9.2.3 Adsorption an der Oberfläche des Testgefäßes und Stabilität der Testsubstanz

1.9.3 Stufe 2 - Adsorptionskinetik bei einer Konzentration der Testsubstanz

1.9.4 Stufe 3 - Adsorptionsisothermen und Desorptionskinetik/Desorptionsisothermen

1.9.4.1 Adsorptionsisothermen

1.9.4.2 Desorptionskinetik

1.9.4.3 Desorptionsisothermen

2. Daten und Abschlussbericht

2.1 Adsorption

2.1.1 Adsorptionsisothermen

Abbildung 2: Freundlich-Adsorptionskurve, normal und linearisiert

2.1.2 Massenbilanz

2.2 Desorption

2.2.1 Desorptionsisothermen

2.2.2 Testbericht

3. Literaturangaben

Anlagen

Anlage 1 Testplan

Anlage 2 Einfluss der Genauigkeit der Analysenmethode und der Konzentrationsveränderung auf die Genauigkeit von Adsorptionsergebnissen

Anlage 3 Abschätzungsverfahren für K_d

Tabelle 1. Beispielhafte Korrelationen zwischen dem Adsorptionsverteilungskoeffizienten und dem Oktanol-Wasser-Verteilungskoeffizienten

Tabelle 2. Beispielhafte Korrelationen zwischen dem Adsorptionsverteilungskoeffizienten und der Wasserlöslichkeit

Anlage 4 Berechnungen zur Festlegung der Zentrifugationsbedingungen

Abb. 1a. Variationen der Zentrifugationszeit (Bodendichte)

Abb. 1b. Variationen der Zentrifugationszeit (Längen im Gemisch)

Anlage 5 Berechnung von Adsorption A (%) und Desorption D (%)

Abb. 1. Grafische Darstellung eines Adsorptionsgleichgewichts

Abb. 2. Massenkonzentration der Testsubstanz in der wässrigen Phase (C_aq) in Abhängigkeit von der Zeit

Anlage 6 Adsorption-Desorption in Böden: Datenberichtsformulare

C.19 Schätzung des Adsorptionskoeffizienten (K_oc) im Boden und in Klärschlamm mittels der Hochdruck-Flüssigchromatografie (HPLC)

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Testmethode

1.5 Anwendbarkeit des Tests

1.6 Qualitätskriterien

1.6.1 Genauigkeit

1.6.2 Wiederholbarkeit

1.6.3 Reproduzierbarkeit

1.7 Beschreibung der Testmethode

1.7.1 Vorbereitende Schätzung des Adsorptionskoeffizienten

1.7.2 Geräte

1.7.3 Mobile Phasen

1.7.4 Gelöste Stoffe

1.8 Durchführung des Tests

1.8.1 Testbedingungen

1.8.2 Bestimmung der Totzeit t_o

1.8.2.1 Bestimmung der Totzeit t_o durch eine homologe Reihe

1.8.2.2 Bestimmung der Totzeit t_o durch inerte Stoffe, bei denen keine Retention durch die Säule auftritt

1.8.3 Bestimmung der Retentionszeiten t_R

1.8.4 Bewertung

2. Daten und Berichterstattung

3. Literaturhinweise

Tabelle 1: Vergleich von K_oc-Werten für Böden und Klärschlämme, und mittels der HPLC-Screeningmethode berechneten Werten

Tabelle 2: Ergebnisse eines Ringversuchs (11 teilnehmende Laboratorien) zur Verbesserung und Validierung der HPLC-Methode

Tabelle 3: Empfohlene Referenzsubstanzen für die HPLC-Screeningmethode auf der Grundlage von Bodenadsorptionsdaten

C.20Daphnia magna-Reproduktionstest

Validitätskriterien

Anlagen

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Herstellung der vollständig definierten Medien Elendt M7 und M4

Anlage 3 Analyse des gesamten organischen Kohlenstoffs (TOC) und Erstellung von Nomogrammen für den TOC-Gehalt von Algenfutter

Anlage 4 Beispieldatenblatt zur Protokollierung der Erneuerung des Prüfmediums, von physikalisch-chemischen Überwachungsdaten, der Fütterung, Daphnien-Reproduktion und Mortalität von Elterntieren

Anlage 5 Beispieldatenblatt für die Protokollierung der Ergebnisse der chemischen Analyse

a) Gemessene Konzentrationen

b) Gemessene Konzentrationen in Prozent der Nominalkonzentrationen

Anlage 6 Berechnung eines zeitgewichteten Mittels

Abbildung 1 Beispiel für ein zeitgewichtetes Mittel

Tabelle 1 Berechnung des zeitgewichteten Mittels

Anlage 7 Leitfaden für die Geschlechtsbestimung bei frisch geschlüpften Daphnien

Abbildung 1 24 Stunden altes Männchen (links) und Weibchen (rechts) der Art D. magna.

C.21 Bodenmikroorganismen: Stickstofftransformationsstest

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Testmethode

1.5 Validität des Tests

1.6 Beschreibung der Testmethode

1.6.1 Geräte

1.6.2 Auswahl und Anzahl der Röden

1.6.3 Entnahme und Lagerung von Bodenproben

1.6.3.1 Entnahme

1.6.3.2 Lagerung

1.6.4 Handhabung und Vorbereitung des Bodens für den Test

1.6.4.1 Vorinkubation

1.6.4.2 Physikalisch-chemische Eigenschaften

1.6.4.3 Anreicherung mit organischem Substrat

1.6.5 Vorbereitung der Testsubstanz zur Applikation auf den Boden

1.6.6 Testkonzentrationen

1.7 Durchführung des Tests

1.7.1 Expositionsbedingungen

1.7.1.1 Behandlung und Kontrolle

1.7.1.2 Inkubation von Bodenproben

1.7.1.3 Testbedingungen und -dauer

1.7.2 Probenahme und Analyse von Böden

1.7.2.1 Probenahmeintervalle

1.7.2.2 Analyse von Bodenproben

2. Daten

2.1 Aufbereitung der Ergebnisse

2.2 Interpretation der Ergebnisse

3. Abschlussbericht

4. Literaturangaben

C.22 Bodenmikroorganismen: Kohlenstofftransformationstest

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Prinzip der Testmethode

1.5 Validität des Tests

1.6 Beschreibung der Testmethode

1.6.1 Geräte

1.6.2 Auswahl und Anzahl der Böden

1.6.3 Entnahme und Lagerung von Bodenproben

1.6.3.1 Entnahme

1.6.3.2 Lagerung

1.6.4 Handhabung und Vorbereitung des Bodens für den Test

1.6.4.1 Vorinkubation

1.6.4.2 Physikalischchemische Eigenschaften

1.6.5 Vorbereitung der Testsubstanz zur Applikation auf den Boden

1.6.6 Testkonzentrationen

1.7 Durchführung des Tests

1.7.1 Expositionsbedingungen

1.7.1.1 Behandlung und Kontrolle

1.7.1.2 Inkubation von Bodenproben

1.7.1.3 Testbedingungen und -dauer

1.7.2 Probenahme und Analyse von Böden

1.7.2.1 Probenahmeintervalle

1.7.2.2 Messung von Glucoseinduzierten Respirationsraten

2. Daten

2.1 Aufbereitung der Ergebnisse

2.2 Interpretation der Ergebnisse

3. Abschlussbericht

4. Literaturangaben

C.23 Aerobe und anaerobe Transformation im Boden

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Anwendbarkeit des Tests

1.5 Informationen zur Testsubstanz

1.6 Prinzip der Testmethode

1.7 Qualitätskriterien

1.7.1 Wiederfindungsraten

1.7.2 Wiederholbarkeit und Empfindlichkeit der Analysenmethode

1.7.3 Genauigkeit der Transformationsdaten

1.8 Beschreibung der Testmethode

1.8.1 Geräte und chemische Reagenzien

1.8.2 Applikation der Testsubstanz

1.8.3 Böden

1.8.3.1 Bodenauswahl

1.8.3.2 Probenahme, Handhabung und Lagerung von Böden

1.9 Durchführung des Tests

1.9.1 Testbedingungen

1.9.1.1 Testtemperatur

1.9.1.2 Feuchtegehalt

1.9.1.3 Aerobe Inkubationsbedingungen

1.9.1.4 Sterile aerobe Bedingungen

1.9.1.5 Anaerobe Inkubationsbedingungen

1.9.1.6 Inkubation unter Reisfeldbedingungen

1.9.1.7 Testdauer

1.9.2 Durchführung des Tests

1.9.3 Probenahme und Messung

1.9.4 Fakultative Tests

2. Daten

2.1 Aufbereitung der Ergebnisse

2.2 Evaluierung und Interpretation der Ergebnisse

3. Abschlussbericht

4. Literaturangaben

Anlage 1 Wasserspannung, Feldkapazität (FK) und Wasserhaltekapazität (WHK)

Anlage 2 Bodenfeuchtegehalt (in g Wasser je 100 g Boden TG) verschiedener Bodenarten aus unterschiedlichen Ländern

Anlage 3

Abbildung 1 Beispiel eines Durchflussapparats für die Untersuchung der Transformation von Chemikalien im Boden

Abbildung 2 Beispiel eines Biometergefäßes für die Untersuchung der Transformation von Chemikalien im Boden

C.24 Aerobe und anaerobe Transformation in Wasser-Sediment-Systemen

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Definitionen

1.3 Referenzsubstanzen

1.4 Informationen zur Testsubstanz

1.5 Prinzip der Testmethode

1.6 Anwendbarkeit des Tests

1.7 Qualitätskriterien

1.7.1 Wiederfindungsraten

1.7.2 Wiederholbarkeit und Empfindlichkeit der Analysenmethode

1.7.3 Genauigkeit der Transformationsdaten

1.8 Beschreibung der Methode

1.8.1 Testsystem und Geräte

1.8.2 Auswahl und Anzahl von Wassersedimenten

1.8.2.1 Sedimentauswahl

1.8.2.2 Charakterisierung von Wasser-Sediment-Proben

1.8.3 Probenahme, Handhabung und Lagerung

1.8.3.1 Probenahme

1.8.3.2 Handhabung

1.8.3.3 Lagerung

1.8.4 Vorbereitung der Sediment-/Wasserproben für den Test

1.9 Durchführung des Tests

1.9.1 Testbedingungen

1.9.2 Behandlung und Applikation der Testsubstanz

1.9.3 Testdauer und Probenahme

1.9.4 Fakultative Voruntersuchung

1.9.5 Messungen und Analyse

2. Daten

2.1 Aufbereitung der Ergebnisse

3. Abschlussbericht

3.1 Testbericht

4. Literaturangaben

Anlage 1 Anleitung zu den aeroben und den anaeroben Testsystemen

Anlage 2 Beispiel eines Durchflusssystems

Anlage 3 Beispiel eines Biometersystems

Anlage 4 Beispielrechnung für die Applikationsdosis in Testgefäßen

C.25 Aerobe Mineralisation in Oberflächenwasser - Simulationstest zur biologischen Abbaubarkeit

1. Methode

1.1 Einleitung

1.2 Begriffsbestimmungen

1.3 Anwndbarkeit der Prüfmethode

1.4 Prinzip der Prüfmethode

1.5 Informationen zur Prüfsubstanz

1.6 Referenzsubstanz

1.7 Qualitätskriterien

1.7.1 Wiederfindungsraten

1.7.2 Wiederholbarkeit und Empfindlichkeit der Analysemethode

1.8 Beschreibung der Prüfmethode

1.8.1 Apparatur

1.8.2 Stammlösungen der Prüfsubstanz

1.8.3 Entnahme und Transport von Oberflächenwasser

1.8.4 Lagerung und Vorbereitung des Oberflächenwassers

1.8.5 Vorbereitung von mit Sedimenten aufbereitetem Wasser (fakultativ)

1.8.6 Semikontinuierliches Verfahren (fakultativ)

1.8.7 Zugabe der Prüfsubstanz (bzw. der Referenzsubstanz)

1.8.8 Prüfbedingungen

1.8.8.1 Testtemperatur

1.8.8.2 Vermischung

1.8.8.3 Testdauer

1.8.9 Verfahren

1.8.9.1 Vorbereitung der Kolben für den pelagischen Test

1.8.9.2 Anzahl der Kolben und Proben

1.8.9.3 Vorbereitung der Kolben für Tests mit suspendierten Sedimenten (fakultativ)

1.8.9.4 Radiochemische Bestimmungen

1.8.9.5 Spezifische chemische Analyse

2. Daten und Abschlussbericht

2.1 Behandlung der Ergebnisse

2.1.1 Grafische Darstellung der Daten

2.1.2 Restaktivität

2.2 Auswertung der Ergebnisse

2.3 Validität des Tests

3. Prüfbericht

4. Literatur

Anhang 1 Phasenverteilung¹⁴C

Anhang 2 Semikontinuierliches Verfahren

Anhang 3 Bestimmung des¹⁴CO₂-Anteils

Abbildung 1a Beispiel einer arithmetischen Darstellung der Daten (Restaktivität/Zeit)

Abbildung 1b Beispiel einer semilogarithmischen Darstellung der Daten (In Restaktivität/Zeit)

C.26 LEMNa SP. - Wachstumsinhibitionstest

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Beschreibung Lemna spp.

Anlage 3 Haltung der Stammkultur

Anlage 4 Medien

C.27 Chironomiden-Toxizitätstest in Sediment-Wasser-Systemen mit gespiktem Sediment

Gültigkeit der Ergebnisse

Versuchsaufbau

Anlagen

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Empfehlungen für die Anzucht von Chironomus riparius

Tabelle 1: Stammlösungen der Spurenelemente für das M4- und das M7-Medium

Tabelle 2: Makronährstoff-Stammlösungen für das M4- und das M7-Medium

Tabelle 3: Vitamin-Stammlösung für das M4- und das M7-Medium

Anlage 3 Zubereitung des formulierten Sediments

Anlage 4 Chemische Eigenschaften eines geeigneten Verdünnungswassers

Anlage 5 Empfehlungen für die Beobachtung des Schlüpfens der Chironomidenlarven

C.28 Chironomiden-Toxizitätstest in Sediment-Wasser-Systemen mit gespiktem Wasser

Gültigkeit der Ergebnisse

Versuchsaufbau

Anlagen

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Empfehlungen für die Anzucht von Chironomus riparius

Tabelle 1: Stammlösungen der Spurenelemente für das M4- und das M7-Medium

Tabelle 2: Makronährstoff-Stammlösung für das M4- und das M7-Medium

Tabelle 3: Vitamin-Stammlösung für das M4- und das M7-Medium

Anlage 3 Zubereitung des formulierten Sediments

Anlage 4 Chemische Eigenschaften eines geeigneten Verdünnungswassers

Anlage 5 Empfehlungen für die Beobachtung des Schlüpfens der Chironomidenlarven

C.29 Leichte biologische Abbaubarkeit - Bestimmung von CO₂ in geschlossenen Flaschen (headspace-Test)

Anwendungsbereich der Methode

Reproduzierbarkeit

Anlage 1 Abkürzungen und Definitionen

Anlage 2 Beispiel einer Abbaukurve

Abbildung 1 Bioabbau von Octan-1-ol im CO₂-headspace-Test

C.30 Bioakkumulation in terrestrischen Oligochaeten

Voraussetzungen

Gültigkeit des Tests

Anlagen

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Berechnung der Aufnahme- und Eliminationsparameter

Anlage 3 Probenahmeplan für die Testung der Bioakkumulation im Boden-Beispiele

Anlage 4 Kunsterde - Empfehlungen für die Zubereitung und Lagerung

Anlage 5 Als Testspezies für die Bestimmung der Bioakkumulation aus dem Boden empfohlene Arten terrestrischer Oligochaeten

C.31 Wachstumstest bei Landpflanzen: Untersuchung von Auflauf und Wachstum von Keimlingen

Anlagen

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Liste der Üblicherweise für Pflanzentests verwendeten Arten

Anlage 3 Liste potenzieller Nichtkulturpflanzen

Anlage 4 Beispiele für geeignete Wachstumsbedingungen für bestimmte Pflanzenarten

C.32 Enchytraeen-Reproduktionstest

Beschreibung des Tests

Durchführung der Tests

Anlagen

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Bestimmung der maximalen Wasserhaltekapazität

Anlage 3 Bestimmung des pH-Wertes von Böden

Anlage 4 Kulturbedingungen für Enchytraeus sp.

Anlage 5 Durchführung der Prüfung mit anderen Enchytraeus-Arten

Anlage 6 Detaillierte Beschreibung der Entnahmeverfahren

Anlage 7 Überblick über die statistische Auswertung der Daten (NOEC-Bestimmung)

C.33 Reproduktionstest mit Regenwürmern (Eisenia Fetida/Eisenia Andrei)

Anlagen

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Bestimmung der maximalen Wasserhaltekapazität des künstlichen Bodens

Anlage 3 Bestimmung des pH-Wertes von Böden

Anlage 4 Anzucht von Eisenia fetida/Eisenia andrei

Anlage 5 Verfahren zum Zählen der aus den Kokons geschlüpften juvenilen Würmer

Anlage 6 Übersicht über die statistische Auswertung der Daten (NOEC-Bestimmung)

C.34 Bestimmung der Hemmung Anaerober Bakterien - Reduktion der Gasproduktion von anaerobem Faulschlamm

Anwendungsbereich der Methode

Interferenzen/Fehler

Anlagen

Anlage 1 Muster einer Apparatur zur Messung der Biogasproduktion anhand des Gasdrucks

Anlage 2 Umrechnung der Druckmesswerte

Anlage 3 Bekannte Faktoren, die Ergebnisse verfälschen können

Anlage 4 Anwendung auf Umweltproben mit niedriger Biomassekonzentration - Anaerobe Schlämme, Sedimente usw.

Anlage 5 Begriffsbestimmungen

C.35 Sediment-Wasser-Toxizitätsstudie mit Dotiertem Sediment an Lumbriculus

Voraussetzungen und praktische Hinweise

Referenzprüfung

Durchführung der Prüfung

Anlagen

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Zusammensetzung des empfohlenen rekonstituierten Wassers (übernommen aus Kapitel C.1 dieses Anhangs (1))

Anlage 3 Physikalisch-Chemische Eigenschaften eines geeigneten Testwassers

Anlage 4 Empfohlenes künstliches Sediment - Empfehlungen für Herstellung und Lagerung

Anlage 5 Kulturmethoden für Lumbriculus variegatus

Anlage 6 Zusammenfassung der Ergebnisse des Ringtests

Tabelle 1: Ergebnisse der einzelnen Ringtestdurchläufe: durchschnittliche Anzahl Würmer in den Kontrollen und in den Lösungsmittelkontrollen bei Testende; SD = Standardabweichung; CV = Variationskoeffizient

Tabelle 2: Ergebnisse der einzelnen Ringtestdurchläufe: durchschnittliches Gesamttrockengewicht der Würmer pro Replikat in den Kontrollen und in den Lösungsmittelkontrollen bei Testende; SD = Standardabweichung; CV = Variationskoeffizient

Tabelle 3: PCP-Toxizität: Zusammenfassung der Endpunkte im Ringtest; Durchschnittswerte der beteiligten Labors für EC₅₀, NOEC und LOEC; SD = Standardabweichung; CV = Variationskoeffizient

C.36 Reproduktionstest mit Raubmilben (Hypoaspis (Geolaelaps) Aculeifer) in Bodenproben

Beschreibung des Tests

Anlagen

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Bestimmung der maximalen Wasserhaltekapazität des künstlichen Bodens

Anlage 3 Bestimmung des pH-Wertes von Böden

Anlage 4 Anzucht von Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer und Lebensmittelmilben und Synchronisation der Kulturen

Anlage 5 Extraktionsverfahren

Anlage 6 Identifizierung von Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer

Anlage 7 Basisinformationen zur Biologie von Hypoaspis (Geolaelaps) aculeifer

Anlage 8 Zusammenfassung und Zeitrahmen für die wichtigsten Verfahrensschritte zur Durchführung des Hypoaspis-Tests

C.37 21-Tage Fisch-Screening-ASSAY: Ein Kurzzeittest zur Bestimmung der Östrogenen und androgenen Aktivität und der Aromatasehemmung

Gültigkeitskriterien

Versuchsplan

Leitlinien für die Auswertung und Validität der Testergebnisse

Anlagen

Anlage 1 Abkürzungen und Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Versuchsbedingungen für den Fisch-Screening-Test zur Bestimmung endokriner Wirkungen

Anlage 3 Chemische Merkmale eines geeigneten Verdünnungswassers

Anlage 4A Laichsubstrat für Zebrabärblinge

Anlage 4B Laichsubstrat für Dickkopfelritzen

Anlage 5A Bewertung der sekundären Geschlechtsmerkmale bei Dickkopfelritzen zum Nachweis bestimmter Chemikalien mit endokriner Wirkung

Anlage 5B Bewertung der sekundären Geschlechtsmerkmale bei Japanischen Reiskärpflingen zum Nachweis bestimmter Chemikalien mit endokriner Wirkung

Anlage 6 Empfohlene Verfahren für die Entnahme von Proben für die Vitellogenin-Analyse

Verfahren 1A: Dickkopfelritze, Blutentnahme aus der Schwanzvene/-arterie

Verfahren 1B: Dickkopfelritze, Blutentnahme aus dem Herzen

Verfahren 2A: Japanische Reiskärpflinge, Exzision der Leber

Verfahren 2B: Japanische Reiskärpflinge (Oryzias latipes), Vorbehandlung der Leber für die Vitellogenin- Analyse

1. Zugabe des Homogenatpuffers

2. Homogenisieren der Leber

3. Zentrifugen des suspendierten Leberhomogenats

4. Entnahme des Überstands

Verfahren 3A: Zebrabärblinge, Blutentnahme aus der Schwanzvene/-arterie

Verfahren 3B: Zebrabärblinge, Blutentnahme durch Herzpunktion

Verfahren 3C: Standardarbeitsverfahren (SOP): Zebrabärblinge, Homogenisierung von Kopf- und Schwanzgewebe

Anlage 7 Vitellogeninangereicherte Proben und Inter-Assay-Referenzstandard

Anlage 8 Flussdiagramm als Entscheidungshilfe für die statistischen Analyse

C.38 Der Amphibien-Metamorphose-Assay (AMA)

Tabelle 1: Fütterungsprotokoll bei handelsüblichem Larvenfutter (z.B. Sera Micron ®) in den Validierungsstudien mit X.-laevis-Larven während der Invivo-Phase des AMa mit einem Durchflusssystem

Tabelle 2: Auffällige morphologische Merkmale von Entwicklungsstadien nach der Beschreibung von Nieuwkoopund Faber

Tabelle 3 Zeitpunkte der Beobachtungen zur Kontrolle primärer Endpunkte im AMA

Tabelle 4. Leistungskriterien des AMA

Anlagen

Anlage 1

Tabelle 1: Versuchsbedingungen des 21-Tage-Amphibien-Metamorphose-Assay (21-Tage-AMA)

Anlage 2 Berichttabellen für Rohdaten und Zusammenfassung

Tabelle 1: Allgemeine Informationen zur Prüfchemikalie

Tabelle 2: Rohdatenbogen für die Tage 7 und 21

Tabelle 3: Berechnete Summen der Endpunktdaten der Tage 7 und 21

Tabelle 4: Tägliche Mortalität

Tabelle 5: Kriterien für die Wasserqualität

Tabelle 6: Zusammenfassung chemische Daten

Tabelle 7: Histopathologische Berichttabellen - Kernkriterien

Tabelle 8: Weitere histopathologische Kriterien

Tabelle 9: Ausformulierte Beschreibungen der histopathologischen Ergebnisse

Tabelle 10: Zusammenfassende Übersicht Tag x (7 oder 21) des AMA

Tabelle 11: Zusammenfassende Übersicht Tag x (7 oder 21) Daten zu Entwicklungsstadien im AMA

Anlage 3 Alternative Gewichts- und Längenanalyse in späten Entwicklungsstadien bei > 20 % der Larven in einer oder mehreren Konzentrationen

Anlage 4 Begriffsbestimmungen

C.39 Collembolen-Reproduktionstests in Böden

Beschreibung des Tests

Anlagen

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Wesentliche Schritte und Verlauf eines Colembolen-Tests

Anlage 3 Leitlinien zur Zucht und zur Synchronisierung von F. fimetaria und F. candida

1. Aufzucht

2. Synchronisierung

3. Alternative Collembolen-Arten

Anlage 4 Extraktion und Zählen der Tiere

1. Zwei Extraktionsmethoden kommen in Betracht

2. Zählen

Anlage 5 Ermittlung der maximalen Wasserrückhaltefähigkeit des Bodens

Anlage 6 pH-Bestimmung des Bodens

C.40 Lebenszyklus-Toxizitätstests bei Chironomiden in Sediment-Wasser-Systemen mit dotiertem Sediment

Versuchsaufbau

Durchführung

Anlagen

Anlage 1 Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Empfehlungen für die Anzucht von Chironomus riparius

Tabelle 1: Stammlösungen der Spurenelemente für das M4- und das M7-Medium

Tabelle 2: Makronährstoff-Stammlösung für das M4- und das M7-Medium

Tabelle 3: Vitamin-Stammlösung für das M4- und das M7-Medium

Zusammensetzung des Sediments

Anlage 3 Zubereitung des formulierten Sediments

Zubereitung

Lagerung

Anlage 4 Chemische Eigenschaften eines geeigneten Verdünnungswassers

Anlage 5 Leitlinien zur Durchführung des Tests

C.41 Fish Sexual Development Test (Test zur Geschlechtsentwicklung bei Fischen)

Tabelle 1: Reaktion der endokrin relevanten Endpunkte auf unterschiedliche Wirkungsweisen von Chemikalien

Anlagen

Anlage 1 Abkürzungen und Begriffsbestimmungen

Anlage 2 Versuchtsbedingungen des FSDT (Süsswasser-Arten)

Anlage 3 Chemische Eigenschaften eines geeigneten Wassers

Anlage 4 Aus Prüfmethode C.14 / Leitlinien zu Prüfkonzentrationen

Anlage 5 Leitlinien zur Herstellung von Kopf- und Schwanz-Homogenaten von juvenilen Zebrabärblingen, Dickkopfelritzen, Dreistachligen Stichlingen und japanischen Reiskärpflingen

Anlage 6 Leitlinien zur Bestimmung der Vitellogenin-Konzentration in Kopf- und Schwanz- Homogenaten von Zebrabärblingen (Danio rerio) (modifiziert nach Holbech et al., 2001); alternativ können auch andere Verfahren unter Verwendung homologer Antikörper und andere Standards angewendet werden

Anlage 7 Leitlinien zur Präparation von Gewebeschnitten zur Geschlechtsbestimmung und zur Beurteilung des Stadiums der Gonadenentwicklung

Anlage 8

Anlage 9 Leitlinien zur Bestimmung des genetischen Geschlechts mit Gewebeproben und durch Polymerase-Kettenreaktion

Anlage 10 Leitlinien zur Herstellung von Gewebeproben zur Bestimmung des genetischen Geschlechts durch PCR beim Dreistachligen Stichling

Anlage 11 Leitlinien zur künstlichen Befruchtung bei Dreistachligen Stichlingen

C.42 Biologische Abbaubarkeit in Meerwasser

Allgemeine Einleitung

Wahl der Methoden

Tabelle Vorteile und Nachteile des Schüttelkolben-Tests und des geschlossenen Flaschentests

Schüttelmethode

Reproduzierbarkeit und Empfindlichkeit der Methode

Geschlossener Flaschen-Test

Reproduzierbarkeit

Anlagen

Anlage 1 Bestimmung des Gehalts an organischem Kohlenstoff in Meerwasser

Anlage 2 Biologischer abbau in Meerwasser

Anlage 3 Berechnung des theoretischen biochemischen Sauerstoffbedarfs

Anlage 4

Anlage 5 Biologischer Abbau in Meerwasser

C.43 Anaerobe biologische Abbaubarkeit organischer Stoffe in Faulschlamm: Bestimmung durch Messung der Gasproduktion

Reproduzierbarkeit von Prüfergebnissen

Anlagen

Anlage 1 Beispiel einer Apparatur zur Messung der Biogasproduktion anhand des Gasdrucks

Anlage 2 Umrechnung der Messwerte des Druckmessers

Anlage 3 Beispiel einer Abbaukurve (Kumulativer Netto-Druckanstieg)

Anlage 4 Datenblätter zur Prüfung der anaeroben biologischen Abbaubarkeit (Beispiel) - Datenblatt zum Prüfstoff

C.44 Versickerung in Bodensäulen

Begriffsbestimmungen und Einheiten

Tabelle 1: Leitlinien zur Auswahl von Böden für Versickerungsstudien

Anlage 1 Begriffsbestimmungen und Einheiten

Anlage 2

Anlage 3 Relative Mobilitätsfaktoren * (RMF) der Chemikalien einiger Pflanzenschutzmittel (Beispiele) (1)(2) und entsprechende Mobilitätsklassen +

C.45 Abschätzung der Emissionen von mit Holzschutzmitteln behandeltem Holz in die Umwelt: Labormethode für unbeschichtete Holzprodukte, die mit Süsswasser oder mit Meerwasser in Berührung kommen

Messung der von den Holzschutzmitteln ausgehenden Emissionen

Schutzbehandlung

Emissionsmessungen

Anlage 1 Berichtsformular für das Prüfverfahren

Anlage 2 Begriffsbestimmungen

C.46 Bioakkumulation in sedimentbewohnenden benthischen Oligochaeten

Voraussetzungen und Informationen zum Prüfstoff

Durchführung der Prüfung

Anlagen

Anlage 1 Begriffsbestimmungen und Einheiten

Anlage 2 Berechnung der Aufnahme- und Eliminationsparameter

Anlage 3 Beispiel eines Probenahmeplans bei einem 28-Tägigen Bioakkumulationstest

a) Aufnahmephase (einschließlich einer 4-tägigen Equilibrierungsphase)

b) Eliminationsphase

Anlage 4 Einige physikalisch-chemische Eigenschaften eines geeigneten Verdünnungswassers

Anlage 5 Künstliches Sediment - Empfehlungen für die Herstellung und Lagerung

Anlage 6 Empfohlene Oligochaeten-Arten für Bioakkumulationstests

C.47 Toxizitätsprüfung an Fischen im frühen Entwicklungsstadium

Validität der Prüfung

Durchführung des Tests

Tabelle 1 Für die Prüfung empfohlene Fischarten

Anlagen

Anlage 1 Definitionen

Abbildung 1 Beschreibung der verschiedenen verwendeten Längen

Anlage 2 Prüfbedingungen, Dauer und Überlebenskriterien für empfohlene Fischarten

Anlage 3 Leitlinie zur Fütterung und Handhabung von Zucht- und Prüftieren der empfohlenen Arten

Anlage 4 Chemische Eigenschaften eines geeigneten Verdünnungswasssers

Anlage 5 Leitlinie für die statistische Analyse der NOEC-Bestimmung

Tabelle 1 90. Perzentil der Variationskoeffizienten für ausgewählte Süßwasserarten

Abbildung 2 NOEC-Flussdiagramm für Größenmessungen (Länge und Gewicht)

Formel 1 Tarone-C(α)-Test (Tarone 1979)

Abbildung 3 NOEC-Flussdiagramm für Schlupferfolg und Larvenmortalität

Anlage 6 Leitlinie für statistische Regressionsanalysen

Abbildung 4 Flussdiagramm für die Schätzung der ECx für die mittlere Länge, das mittlere Gewicht und den mittleren Anteil an geschlüpften Eiern oder toten Larven je Replikat (Erläuterungen im Text)

C.48 Kurzzeit-Reproduktionstest an Fischen

Gültigkeitskriterien

Versuchsplan

Leitlinien für die Auswertung und Akzeptanz der Testergebnisse

Anlagen

Anlage 1 Abkürzungen und Definitionen

Anlage 2 Versuchsbedingungen für den Fisch-Screening-Test zur Bestimmung endokriner Wirkungen

Anlage 3 Chemische Merkmale eines geeigneten Verdünnungswassers

Anlage 4A Laichsubstrat für Zebrabärblinge

baichsubstrat für Dickkopfelritzen

Anlage 5A Bewertung der sekundären Geschlechtsmerkmale bei Dickkopfelritzen zum Nachweis bestimmter Chemikalien mit endokriner Wirkung

Anlage 5B Bewertung der sekundären Geschlechtsmerkmale bei japanischen Reiskärpflingen zum Nachweis bestimmter Chemikalien mit endokriner Wirkung

Abb. 1 Schaubild zur Veranschaulichung der an Form und Größe der Afterflosse erkennbaren Geschlechtsunterschiede; a - männlich; B - weiblich. Oka, T. B., 1931

Abb. 2 a - Prozesse auf verbundenen Afterflossenplatten. J.P. - verbundene Platte; A.S. - axialer Bereich; P - Prozess. B - Distales Ende des Flossenstrahls; Actinotrichien (Act.) an der Spitze; Oka, T. B., 1931

Abb. 3 Foto eines Fischkörpers mit Schnittstelle bei Fixierung der Gonaden in einer anderen Fixierlösung als 10 %iges neutral gepuffertes Formalin

Anlage 6 Empfohlene Verfahren für die Entnahme von Proben für die Vitellogenin-Analyse

Verfahren 1A: Dickkopfelritze, Blutentnahme aus der Schwanzvene/-arterie

Verfahren 1B: Dickkopfelritze, Blutentnahme aus dem Herzen

Verfahren 2A: Japanische Reiskärpflinge, Exzision der Leber

Abb. 1 Unmittelbar vor den Brustflossen einen Schereneinschnitt vornehmen

Abb. 2 Auf der Bauchmittellinie bis zu einem Punkt etwa 2 mm kranial vor dem After einen Scherenschnitt durchführen

Abb. 3 Die Bauchwände mit einer Pinzette spreizen, um die Leber und die anderen inneren Organe freizulegen

Abb. 4 Die Leber grob sezieren und mit einer Pinzette entnehmen

Abb. 5 Darm mit der Pinzette vorsichtig herausziehen

Abb. 6 Beide Darmenden und etwaiges mesenteriales Gewebe mit einer Schere durchtrennen

Abb. 7 (Weibchen) Das Verfahren ist bei männlichen und weiblichen Fischen dasselbe

Abb. 8 Verfahren abgeschlossen

Verfahren 2B: Japanische Reiskärpflinge (Oryzias latipes), Vorbehandlung der Leber für die Vitellogenin-Analyse

Verfahren 3A: Zebrabärblinge, Blutentnahme aus der Schwanzvene/-arterie

Verfahren 3B: Zebrabärblinge, Blutentnahme durch Herzpunktion

Verfahren 3C: Standardarbeitsverfahren (SOP): Zebrabärblinge, Homogenisierung von Kopf- und Schwanzgewebe

Anlage 7 Vitellogenin-angereicherte Proben und Inter-Assay-Referenzstandard

Anlage 8 Flussdiagramm als Entscheidungshilfe für die statistische Analyse

C.49 Prüfung auf akute Toxizität an Fischembryonen (FET)

Validität der Prüfung

Tabelle 1 Apikale Beobachtungen der akuten Toxizität in Zebrabärblingsembryonen 24 bis 96 Stunden nach der Befruchtung

Anlagen

Anlage 1 Definitionen

Anlage 2 Versuchsbedingungen für den Fisch-Screening-Test zur Bestimmung endokriner Wirkungen

Anlage 3 Normale Entwicklung von Zebrabärblingen bei 26 °C

Abb. 1: Ausgewählte Stufen der frühen Entwicklung von Zebrabärblingen(Danio rerio)

Abb. 2: Ausgewählte Stufen der späten Entwicklung von Zebrabärblingen(Danio rerio) (entchorionierter Embryo zur besseren Veranschaulichung)

Abb. 3: Normale Entwicklung von Zebrabärblingsembryonen(Danio rerio)

Anlage 4

Abb. 1 Einteilung von 24-Well-Platten

Abb. 2 Schema der Toxizitätsprüfung an Embryonen von Zebrabärblingen (von links nach rechts)

Anlage 5 Atlas der letalen Endpunkte für die Prüfung auf akute Toxizität an Embryonen von Zebrabärblingen

Abb. 1 Koagulation des Embryos

Abb. 2 Fehlende Somitenbildung

Abb. 3 Fehlende Abtrennung der Schwanzknospe in der Seitenansicht

Abb. 4 Fehlender Herzschlag

C.50 Sedimentfreier Myriophyllum spicatum-Toxizitätstest

Anlagen

Bnitionen

Anlage 2 Modifiziertes Andrews-Medium für Stamm- und Vorkultur

Tabelle 1 Zusammensetzung der Andrews-Nährlösung: (ASTM Designation E 1913-04)

Tabelle 2 Herstellung der Stammlösung 3.1 für die Zubereitung der Stammlösung 3

Anlage 3 Haltung der Stammkultur

Abbildung 1 Schneiden der Pflanzen für die Stamm- und Vorkultur nach 3 Wochen Kultivierung

Abbildung 2 Kultivierung der Pflanzen in einem Kühlinkubator mit Kammerbeleuchtung

Anlage 4 Haltung der Vorkultur und Vorbereitung des Testorganismus für den Test

Abbildung 2 Schneiden der Pflanzen aus der Vorkultur für den sedimentfreien Myriophyllum spicatum-Toxizitätstest

C.51 Myriophyllum spicatum-Toxizitätstest im Wassersediment

Tabelle 1 Bewertungsplan

Auswertung der Daten

Berichterstattung