umwelt-online-Demo: Archivdatei - Siebte Richtlinie 76/372/EWG zur Festlegung gemeinschaftlicher Analysemethoden für die amtliche Untersuchung von Futtermitteln

Anlage Bestimmung von Aflatoxin B₁

A. Methode mit eindimensionaler Dünnschichtchromatographie

1. Zweck und Anwendungsbereich

2. Prinzip

3. Reagenzien

4. Geräte

5. Ausführung

5.1. Vorbereitung der Probe (siehe unter Bemerkungen, Teil C, Punkt 1)
5.2. Extraktion

5.3. Säulenchromatographische Reinigung

5.4. Dünnschicht-Chromatographie

5.5. Quantitative Bestimmung

5.5.1. Visuelle Bestimmung

5.5.2. Durch Fluorodensitometrische Messung

5.6. Identifizierung von Aflatoxin B₁

5.6.1. Behandlung mit Schwefelsäure

5.6.2. Zweidimensionale Chromatographie mit Bildung von Aflatoxin B₁-hemiacetal (Aflatoxin B_2a)

5.6.2.1. Auftragen der Lösungen

5.6.2.2. Entwicklung

5.6.2.3. Interpretation des Chromatogramms

6. Berechnung der Ergebnisse

6.1. Visuelle Messung
6.2. Messungen durch Fluorodensitometrie

7. Herstellung und Kontrolle der Standardlösung (3.16)

7.1. Bestimmung der Aflatoxin-B₁-Konzentration
7.2. Kontrolle der chromatographischen Reinheit

8. Wiederholbarkeit

9. Vergleichbarkeit

B. Bestimmung von Aflatoxin B₁ durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie

1. Zweck und Anwendungsbereich

2. Prinzip

3. Reagenzien

4. Geräte

5. Ausführung

5.1. Vorbereitung der Probe
5.2. Untersuchungsprobe

5.3. Extraktion

5.4. Reinigung

5.4.1. Florisil-SEP-PAK-Reinigung

5.4.1.1. Vorbereitung der Säulen-Kartuschen-Kombination.

5.4.1.2. Reinigung

5.4.2. C₁₈-SEP-PAK-Reinigung

5.4.2.1. Vorbereitung der Säule-Kartuschen-Kombination.

5.4.2.2. Reinigung.

5.5. Hochleistungsflüssigkeitschromatographie

5.5.1. Einstellung der HPLC-Pumpe

5.5.2. Einstellung der Nachsäulenpumpe

5.5.3. Fluoreszenzdetektor

5.5.4. Injektor

5.5.5. Überprüfung der chromatographischen Trennung

5.5.6. Überprüfung der Systemstabilität

5.5.7. Überprüfung der Linearität

5.5.8. Einspritzung der Probenextrakte

6. Identitätsbestätigung

6.1. Weitere Behandlung des Extraktes (5.4.2.2)
6.2. Herstellung der Derivate und Dünnschichtchromatographie

7. Berechnung der Ergebnisse

8. Wiederholbarkeit

9. Vergleichbarkeit

10. Bemerkungen

10.1. Reproduzierbarkeit
Tabelle 1 Wiederholbarkeit (r) und Vergleichbarkeit (R), ausgedrückt als Verhältniszahlen und als Variationskoeffizienten

10.2. Stabilisierung des Chloroforms (3.1)

10.3. Richtigkeit

Abbildung 1 Säulen-Kartuschen-Kombination

Abbildung 2: Flussschema des LC-Systems mit Einrichtung zur
Nachsäulenderivatisierung mit Jod

Abbildung 3: Korrektur der Abweichung des Aflatoxin-B₁-
Responses durch Einspritzung des Bezugsstandards (3.13.3) in
regelmäßigen Abständen

C. Bemerkungen betreffend Methode a und B

1. Entfettung

2. Vergleichbarkeit der Ergebnisse der Methode A

Anlage

Abbildung 1
Abbildung 2

Abbildung 3