Regelwerk, EU chronologisch, EU 2006
RL 2006/56/EG
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Anhang I Testschema für die Diagnose, den Nachweis und die Identifizierung des Erregers der Bakteriellen Ringfäule der Kartoffel, Clavibacter Michiganensis (Smith) Davis et al. ssp. Sepedonicus (Spieckermann et Kotthof) Davis et al.
1. Flussdiagramme
2. Visuelle prüfung auf Ringfäulesymptome
2.1. Kartoffelpflanzen2.2. Kartoffelknollen
3. Probenaufbereitung
3.1. Kartoffelknollen3.2. Kartoffelpflanzen
4. IF-TEST
5. FISH-TEST
5.1. Fixierung des Kartoffelextrakts5.2. Vorhybridisierung und Hybridisierung
5.3. FISH-Test-Befund
6. PCR-TEST
6.1. DNA-Reinigungsmethoden6.2. PCR
6.3. Analyse des PCR-Produktes
7. Biotest
8. Isolierung von C. m. subsp. sepedonicus
8.1. Selektivauutrich8.2. Reinigung verdächtiger Kolonien
9. Identifizierung
9.1. Nähr- und enzymatische Tests zur Identifizierung9.2. IF-Test
9.3. PCR-Test
9.4. FISH-Test
9.5. Bestimmung des Fettsäureprofils (FAP)
9.6. BOX-PCR
10. Bestätigungstest
Anlage 1 An der Optimierung und Validierung von Protokollen beteiligte Laboratorien
Anlage 2 Vorbereitung der Positiv- und Negativkontrollen für die Haupt-Screeningtests (PCR/IF und FISH)
Anlage 3 Puffer für Testverfahren
1. Puffer für Extraktionsverfahren
2. Puffer für den IF-Test
2.2. IF-Puffer-Tween
Anlage 4 Ermittlung des Kontaminationsgrads im IF- und FISH-Test
Anlage 5 Medien zur Isolierung und Kultivierung von C. m. subsp. sepedonicus
Anlage 6 Validiertes PCR-Protokoll und validierte Reagenzien
1. Multiplex-PCR-Protokoll mit interner PCR-Kontrolle (Pastrik, 2000)
2. Vorbereitung des Beladungspuffers
3. 10x Tris-Acetat-EDTA-Puffer (TAE), pH 8,0
Anlage 7 Validierte Reagenzien für den FISH-Test
1. Oligo-Sonden
2. Fixierlösung
3. 3x Hybmix
4. Hybridisierungslösung
5. 0,1M Phosphatpuffer, pH 7,0
Anlage 8 Auberginenkultivierung
Anlage 9 Gram-Färbungsverfahren (modifiziert nach Hucker) (Doetsch, 1981)